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蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)組一詞,源于蛋白質(zhì)與基因組兩個(gè)詞的組合,意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲...
轉(zhuǎn)錄組學(xué)的概念:轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在某一發(fā)育階段或功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的匯合,包括蛋白質(zhì)編碼的信使RNA和非編碼RNA(rRNA、tRNA和其他ncRNAs),高通量測(cè)序技術(shù)也被稱為下一代測(cè)序(NGS)技術(shù),推進(jìn)了基因組學(xué)的研究進(jìn)展。該項(xiàng)新技術(shù)...
蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性,從而檢測(cè)蛋白質(zhì)或者多肽上位點(diǎn)發(fā)生何種修飾??蓹z測(cè)修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;⒎核鼗?、丙酰化、丁?;⒈;?、戊二酰化、琥珀?;?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1...
代謝組學(xué)樣本收集植物組織:果實(shí)、種子:1)對(duì)于含水量高、體積較大的果實(shí)(番茄、西瓜、蘋果等)需要先將樣品分成“均勻”的小塊(≈ 200 mg/樣本)分裝至2 mL離心管中,標(biāo)號(hào)后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。2)對(duì)于細(xì)小的顆粒種子(擬南芥種子、谷物種...
全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序:由于在轉(zhuǎn)錄組研究中通常所使用的第二代測(cè)序技術(shù)具有測(cè)序讀長(zhǎng)的限制,因此在進(jìn)行測(cè)序之前,需要先將樣本的mRNA打碎為小片段,之后再通過(guò)與參考基因組比對(duì)或拼接的方式識(shí)別轉(zhuǎn)錄本,這就會(huì)造成一定的錯(cuò)誤比例,同時(shí)在也很難區(qū)分單堿基水平的差異。全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)...
蛋白組學(xué)研究怎么做?PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行一定定量,因此也被稱之...
轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)路線及研究意義:轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究對(duì)象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。相對(duì)于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺(tái),轉(zhuǎn)錄組測(cè)序無(wú)需預(yù)先針對(duì)已知序列設(shè)計(jì)探針,即可對(duì)任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測(cè),提供更準(zhǔn)確的數(shù)字化信號(hào)...
蛋白質(zhì)組學(xué)研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念,隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點(diǎn),對(duì)蛋白組學(xué)的研究可以使我們更容易接近生命的機(jī)理本質(zhì),但探究成千上萬(wàn)的蛋白質(zhì)特性也是一個(gè)重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是...
質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾:相對(duì)于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù),質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行分析,且可以對(duì)常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進(jìn)行補(bǔ)充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無(wú)法保證可以完全識(shí)...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):1、基礎(chǔ)研究方面:近兩年來(lái)蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,如細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等。在研究對(duì)象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動(dòng)物等范圍,涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。在未來(lái)的發(fā)展中...
代謝組學(xué)研究方法:代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似,通常有兩種方法。一種方法稱作代謝物指紋分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)的方法,比較不同血樣中各自的代謝產(chǎn)物以確定其中所有的代謝產(chǎn)物。...
轉(zhuǎn)錄組學(xué),基因組學(xué),蛋白質(zhì)組學(xué)的區(qū)別:蛋白組學(xué)針對(duì)的是全體蛋白,組要以2D-Gel和質(zhì)譜為主,分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似,將蛋白用特定的物料化學(xué)手段分解成小肽段,在通過(guò)質(zhì)量反推蛋白序列,之后進(jìn)行搜索,標(biāo)識(shí)已知未知的蛋白序...
RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué):也被稱為整個(gè)轉(zhuǎn)錄組鳥測(cè)序(wts)。RNA-seq包含三個(gè)步驟:測(cè)序文庫(kù)的建立,在特定平臺(tái)中測(cè)序和生物信息學(xué)分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術(shù)的新的轉(zhuǎn)錄分析方法。采用NGS技術(shù)對(duì)從感興趣的RNA樣本序列反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行測(cè)序...
代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個(gè)樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請(qǐng)全部取清晨第1...
蛋白組學(xué)研究怎么做?PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行一定定量,因此也被稱之...
蛋白磷酸化修飾過(guò)程:蛋白磷酸化修飾這一過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過(guò)程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測(cè)方法:Western Blot檢測(cè)方法:Western...
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)...
代謝組學(xué)的研究領(lǐng)域有哪些?1、疾病機(jī)制研究。2、疾病診斷與防治。3、新藥篩選和開發(fā)。4、藥物作用機(jī)制的研究。5、藥物毒性評(píng)價(jià)。6、植物的細(xì)胞代謝組學(xué)研究。7、微生物代謝組學(xué)研究。代謝組能夠檢測(cè)到的代謝物含量是多少?不同檢測(cè)平臺(tái)的靈敏度不一樣,靈敏度比較高,可達(dá)...
蛋白質(zhì)組學(xué):對(duì)人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康,主要指促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質(zhì),而很多藥物的靶分子也是蛋白質(zhì)。藥物也可以干預(yù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理研究中,了解人不同發(fā)育、生長(zhǎng)期和不同生...
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過(guò)程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對(duì)蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作...
翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細(xì)胞不同生長(zhǎng)時(shí)期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化,許多至關(guān)重要的生命進(jìn)程不只由蛋白質(zhì)相對(duì)豐度控制,更重要的是被時(shí)空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物...
選擇代謝組學(xué)作為科研技術(shù)手段的優(yōu)勢(shì)有哪些?代謝組學(xué)的研究處于生物信息流的中游,介于基因、蛋白質(zhì)和細(xì)胞、組織之間,在生物信息的傳遞中起到承上啟下的作用。小分子的產(chǎn)生和代謝是基因表達(dá)的下游產(chǎn)物,生物體液的代謝產(chǎn)物分析能夠更直接,更準(zhǔn)確的反映生物體的病理生理狀態(tài)。代...
代謝組學(xué)的研究分為靶向和非靶向。通俗說(shuō)就是你有沒(méi)有目標(biāo)分子。傳統(tǒng)代謝組學(xué)研究利用的是GC-MS,因?yàn)榇x物大多數(shù)都不是高沸點(diǎn)的,而且GC-MS有龐大的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。然后發(fā)展的LC-MS差不多,就是克服了一些高沸點(diǎn)物質(zhì)難以檢測(cè)的弊端。NMR用于代謝組學(xué)不是很多,一...
質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M(jìn)行鑒定、乙?;稽c(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對(duì)乙?;亩芜M(jìn)行富集,然后再對(duì)富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜...
代謝組學(xué)概念:代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW
轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics)是功能基因組學(xué)(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門在整體水平上研究細(xì)胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。隨著人類基因組計(jì)劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學(xué)家也逐...
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀...
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟:?jiǎn)渭?xì)胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴(kuò)增:RNA測(cè)序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測(cè)序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細(xì)胞;顯微操作分選單細(xì)胞;流式分選帶有表面Mark...
蛋白組學(xué)樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無(wú)關(guān)的干擾組織(血管、脂肪、結(jié)締組織等);沖洗干凈,用組織剪或手術(shù)刀將組織分離成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟骨組織:PBS洗滌去除...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要...