RNA-seq轉錄組學:也被稱為整個轉錄組鳥測序(wts)。RNA-seq包含三個步驟:測序文庫的建立,在特定平臺中測序和生物信息學分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術的新的轉錄分析方法。采用NGS技術對從感興趣的RNA樣本序列反轉錄得到的cDNA進行測序。簡而言之,就是對剪切變體、轉錄后RNA編輯、內含子表達水平和特定等位基因的表達情況進行定性和定量分析。RNA-Seq原理:在對基因組測序和分析研究的同時,復雜的轉錄組研究也普遍發(fā)展起來。利用高通量測序技術平臺分析轉錄組的結構和表達水平情況,更能挖掘未知轉錄本和稀有轉錄本信息,精確地識別RNA的選擇性剪切以及編碼序列的單核苷酸多態(tài)性(SPN),進一步解析復雜的轉錄組信息。轉錄組學可應用于表達差異的研究。湖北高通量轉錄組學應用
RNA-seq轉錄組學技術優(yōu)勢有:1、可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度;2、靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本;3、可以對任意物種進行全基因組分析,能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉錄本,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區(qū)域;4、檢測范圍廣,能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。RNA-seq轉錄組學是需要生物學重復的,至少需要兩次生物學重復,3次以上的生物學重復更好。以3個重復為例,加上對照的三個生物學重復,一次RNA-seq需要6個樣本。貴陽單細胞轉錄組學主要技術轉錄學組測序能夠提供更準確的數(shù)字化信號。
轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組學(transcriptomics),是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規(guī)律的學科。簡而言之,轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。轉錄組即一個活細胞所能轉錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。轉錄組學(transcriptomics),是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規(guī)律的學科。簡而言之,轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。
轉錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內所有轉錄產(chǎn)物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結構研究的基礎和出發(fā)點,掌握了生物個體基因轉錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本的基因序列信息。轉錄組學能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉錄本。
全轉錄組測序為什么需要構建兩個文庫?全轉錄組測序需要構建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組學能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。湖北高通量轉錄組學應用
轉錄組學可以對任意物種進行全基因組分析。湖北高通量轉錄組學應用
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