青海歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組有什么用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-12-01

人類細(xì)胞圖譜項(xiàng)目的主要目標(biāo)之一是描述所有細(xì)胞類型的空間關(guān)系。同時(shí)基于表達(dá)特征對(duì)多種細(xì)胞類型進(jìn)行空間映射,有助于研究不同細(xì)胞類型之間的相互作用。已經(jīng)發(fā)展了一些策略來檢測(cè)單細(xì)胞分辨率的空間基因表達(dá)譜,如Slide-seq、seqFISH或MERFISH。為了更有效地為研究群體探索空間基因表達(dá)數(shù)據(jù),我們構(gòu)建了SpatialDB數(shù)據(jù)庫用于空間解析的轉(zhuǎn)錄組。

人類細(xì)胞圖譜項(xiàng)目極大地推動(dòng)了單細(xì)胞水平的生命科學(xué)研究??臻g轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)的發(fā)展和空間基因表達(dá)數(shù)據(jù)的快速積累是未來的發(fā)展趨勢(shì)。我們將繼續(xù)收集新的技術(shù)和數(shù)據(jù)集來更新SpatialDB。此外,我們將整合更多的工具和數(shù)據(jù)源來分析數(shù)據(jù). 10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。青海歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組有什么用

 空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)(ST)是一種方法,允許在組織樣本中可視化和定量分析轉(zhuǎn)錄組與空間分辨率。通過在載玻片上排列含有位置條形碼的寡核苷酸的組織切片,該方法聲稱可以生成具有精確位置信息的高質(zhì)量的RNA-seq cDNA文庫。條形碼芯片有1007個(gè)帶有獨(dú)特條形碼序列的引物位點(diǎn)。每個(gè)位置都有一個(gè)直徑100μm(對(duì)應(yīng)于一個(gè)組織域)中心到中心的距離是200μm。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),在空間轉(zhuǎn)錄組樣本處理、實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)挖掘上的成功經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。山東歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域研究通過對(duì) ALS 小鼠疾病進(jìn)程(癥狀前、發(fā)病、癥狀期和終末期)的脊髓組織進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。

空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析的是根據(jù)每個(gè)芯片上每個(gè) spot 的基因表達(dá)信息進(jìn)行聚類,然后將 spot 根據(jù)坐標(biāo)位置序列放回到組織的圖像上,同時(shí)可以對(duì)每個(gè) gene 在組織上表達(dá)的空間位置進(jìn)行定位。獲得測(cè)序數(shù)據(jù)后,首先利用 Space Ranger  軟件可以自動(dòng)化的對(duì)圖像進(jìn)行處理、數(shù)據(jù)比對(duì)和 Barcode 處理。另外一個(gè)軟件 Loupe Cell Browser 是一個(gè)適用于 Windows 和 MacOS 的桌面應(yīng)用程序,它可以快速、輕松地可視化和分析10X Visium 數(shù)據(jù)。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。

廣義上來說,目前一共有4種解析“空間性轉(zhuǎn)錄組”的策略:2.第一種是利用計(jì)算機(jī)算法,根據(jù)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)來模擬重構(gòu)組織的空間形態(tài)。例如Seurat,這是一個(gè)在單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析中***用到的R包,我們可以利用scRNA-seq數(shù)據(jù),加上對(duì)markegene進(jìn)行原位測(cè)序的結(jié)果來重構(gòu)組織的空間信息。3.第二種,激光顯微切割+二代測(cè)序(LCM+NGS)。這種技術(shù)對(duì)儀器和實(shí)驗(yàn)人員的操作要求較高,而且獲取的通量也比較低,如果組織非常珍貴或者研究的內(nèi)容十分精細(xì),可以考慮這個(gè)。但是這種策略比較難被官方干運(yùn)用。4.第三種策略,就是基于高分辨圖像的原位測(cè)序。**經(jīng)典的是smFISH當(dāng)然,這種方法的通量比較低。當(dāng)然隨著技術(shù)的發(fā)現(xiàn),剛發(fā)布的FISH-seq技術(shù)通過多輪雜交的方式,已經(jīng)把測(cè)序通量提高到了10000+個(gè)轉(zhuǎn)錄本。5.***就是“基于空間條形碼(spatialbarcodes)的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。本文主要討論的也就是這種技術(shù)。后面主要討論的都是基于這種策略。 空間轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測(cè)基因表達(dá)的一種技術(shù)。

Visium空間轉(zhuǎn)錄組能夠做何種組織類型以及推薦切片厚度是什么?10X Genomics測(cè)試過很多組織類型,絕大多數(shù)都可以用于空間轉(zhuǎn)錄組的分析。下圖是他們官網(wǎng)上測(cè)試過的組織類型的列表,測(cè)試過的組織都可以運(yùn)用在空間轉(zhuǎn)錄組的分析上面。但建議用戶用基因表達(dá)玻片做正式實(shí)驗(yàn)前,務(wù)必用組織優(yōu)化的玻片測(cè)試一下,看組織能否用于空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn),同時(shí)也找到比較好的組織通透時(shí)間。切片厚度基本上以10μm為主,但也有少量組織例外。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。只聽名字就想嘗試,不清楚空間轉(zhuǎn)錄組的原理及通過該技術(shù)究竟能拿到什么結(jié)果。湖南10x空間轉(zhuǎn)錄組

對(duì)于 EDA 以外的任務(wù),用戶仍然經(jīng)常需要學(xué)習(xí)新的語法,轉(zhuǎn)換對(duì)象類型,空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)仍然面臨許多挑戰(zhàn)。青海歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組有什么用

1. 空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟A。切片制備和優(yōu)化:取新鮮組織、冷凍、切片,并進(jìn)行HE染色成像,優(yōu)化確定切片是否覆蓋靶向區(qū)域??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟B。切片固定和透化:將組織切片放置在含有與RNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,并進(jìn)行固定和透化,使細(xì)胞中的 mRNA 得到釋放,并結(jié)合到相應(yīng)的捕獲探針上,從而獲取基因表達(dá)信息??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟c。逆轉(zhuǎn)和文庫構(gòu)建:以捕獲的 RNA 為模板,進(jìn)行 cDNA 合成,和測(cè)序文庫制備??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟d。高通量上機(jī)測(cè)序:對(duì)制備好的測(cè)序文庫,進(jìn)行二代高通量短讀長測(cè)序??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟e。數(shù)據(jù)可視化分析:結(jié)合HE結(jié)果,確定哪些基因有表達(dá),表達(dá)量高低,以及這些基因的空間位置信息。青海歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組有什么用

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