廣州PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-20

蛋白質(zhì)組學(xué)研究:蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要分為自底向上(Bottom-Up)和自頂向下(Top-Down)兩種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時(shí),因其類似于基因組測(cè)序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)(ShotgunProteomics)?!白皂斚蛳隆辈呗灾苯予b定完整蛋白質(zhì),在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢(shì)。可是該策略的缺陷是蛋白質(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂。所以鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了比較普遍的應(yīng)用。非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以對(duì)不同物種和不同的樣本類型可以同時(shí)開展蛋白定量分析。廣州PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動(dòng)的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對(duì)細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對(duì)處不同時(shí)期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識(shí)別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動(dòng)態(tài)范圍更廣的研究手段?;谫|(zhì)譜技術(shù),科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,來了解細(xì)胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)。江蘇DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)價(jià)格蛋白質(zhì)組具有很高的細(xì)胞和組織特異性,不同的細(xì)胞組織表達(dá)不同的蛋白質(zhì)組。

蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合相關(guān)技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。3.蛋白質(zhì)功能確定:如分析酶活性和確定酶底物,細(xì)胞因子的生物分析/配基-受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。有的熒光蛋白表達(dá)系統(tǒng)就是研究蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)定位的一個(gè)很好的工具。

蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個(gè)領(lǐng)域的**否認(rèn)它是單純的方法學(xué),就像基因組學(xué)一樣,不是一個(gè)封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識(shí)體系,而是一個(gè)領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學(xué)集中于動(dòng)態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對(duì)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)水平進(jìn)行定量的測(cè)定,鑒定疾病、藥物對(duì)生命過程的影響,以及解釋基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制.作為一門科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當(dāng)前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究對(duì)提高我國(guó)生物醫(yī)學(xué)原始創(chuàng)新能力、重大疾病防診治能力發(fā)展具有重大的戰(zhàn)略意義。

蛋白質(zhì)組學(xué)植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動(dòng)物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會(huì)多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍住H绻欠N仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時(shí)需要添加干冰。蛋白質(zhì)組研究是對(duì)基因組研究的重要補(bǔ)充。廣州PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

蛋白質(zhì)組學(xué)包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。廣州PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。廣州PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)