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蛋白翻譯后修飾位點鑒定:蛋白質翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程,并發(fā)揮十分重要的調控作用。蛋白質修飾位點能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質折疊、活性以及之后的功能,對于蛋白質修飾位點的發(fā)現(xiàn)及研究對闡明蛋白質的功能具有重要作用。技術特點:時間快,周期短;識別位點準確,采用高分辨率質譜技術可以準確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類型。質譜是蛋白質翻譯后修飾檢測的常用技術之一。武漢蛋白質乙酰化修飾組學有哪些
蛋白質磷酸化修飾組學:是植物體內比較常見的PTM修飾手段。它是指通過蛋白激酶和磷酸酶的作用在特定絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基上添加或去除一個或多個磷酸基團,進而有效地改變底物蛋白的結構和活性。在植物體內主要參與植物溫度脅迫、鹽脅迫、干旱脅迫、養(yǎng)分脅迫調控等大多數(shù)代謝和生理途徑。蛋白質磷酸化對于許多生物現(xiàn)象的引發(fā)是很必要的,包括細胞生長、增殖、泛素(ubiquitin)介導的蛋白降解等過程。特別是酪氨酸磷酸化,作為細胞信號轉導和酶活性調控的一種主要方式,通常通過引發(fā)蛋白質之間的相互作用,進而介導生長因子和細胞因子等對細胞膜上受體的信號調控。江蘇泛素化修飾蛋白質組學分析研究蛋白質翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用。
乙?;揎椀鞍捉M學實驗流程:1)組織/細胞破碎,提取蛋白質;2)蛋白酶解成多肽片段;3)對多肽片段進行 iTRAQ 標記;4)高效特異性乙?;贵w富集乙?;揎楇亩?;5)使用 LC-MS/MS 對富集的乙?;亩芜M行序列分析;5)數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町悾Ξa(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。乙?;且粋€普遍而重要的蛋白質翻譯后修飾,不僅集中在對細胞染色體結構的影響以及對核內轉錄調控因子方面,而且還影響參與細胞周期和新陳代謝、肌動蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙酰化不僅存在于真核細胞中,而且越來越多的證據(jù)也表明乙酰化同樣影響許多原核細胞的生理生化過程。
蛋白質翻譯后修飾組學是什么?蛋白質翻譯后修飾是指蛋白質在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程,即通過1個或幾個氨基酸殘基加上修飾基團或通過蛋白質水解剪去基團而改變蛋白質的性質。蛋白質氨基酸序列的特定位置可以與化學基團或者小分子量的蛋白共價結合從而發(fā)生蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),相較于沒有發(fā)生修飾的蛋白,PTMs會導致特定序列分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析;通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。
定量磷酸化蛋白質翻譯修飾組學:蛋白質發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學問題有密切關系。研究蛋白質磷酸化對闡明蛋白質功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術和iTRAQ/TMT/Lable free技術相結合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質組學的定量研究。技術原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結合高分辨率質譜完成對樣品的定量分析。乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?,將乙酰CoA的乙?;鶊F轉移至蛋白質氨基酸的殘基上。廣州氧化修飾蛋白質組學
泛素化修飾蛋白質組學普遍存在于真核細胞內,故名泛素。武漢蛋白質乙?;揎椊M學有哪些
磷酸化修飾蛋白組學應用:蛋白質組(Proteome)泛指一個生命體內所有蛋白質,蛋白質組學(Proteomics)是以蛋白質組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規(guī)律的科學,是對蛋白質進行定性、定量及功能的分析。定性分析包括鑒定蛋白質的序列、PTM及蛋白之間的相互作用,對比來看,磷酸化蛋白質組(Phosphoproteome)就是蛋白質組中全部的磷酸化蛋白質,而磷酸化蛋白質組學(Phosphoproteomics,下文簡稱PP)就是針對磷酸化蛋白質的全方面的分析,包括對磷酸化的鑒定、定位和定量。本來屬于蛋白質組學的一個分支,但隨著研究的深入,人們在各個領域關于PP都有重大發(fā)現(xiàn),基于PP的研究也越來越多。武漢蛋白質乙?;揎椊M學有哪些