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蛋白質(zhì)翻譯后修飾自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽(yáng)離子交換/親水相互作用色譜(WCX-HILIC)與配備電子轉(zhuǎn)移解離(ETD)的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用,對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行,但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問(wèn)題,需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過(guò)濾。自上而下分析策略:自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對(duì)其進(jìn)行片段化,不需要蛋白質(zhì)水解消化。目前,有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法:離線和在線。前者用四維分離法,后者用WCX-HILIC。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙酰化。北京甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué):乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?,將乙酰CoA的乙?;鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上。蛋白質(zhì)乙酰化也是一種可逆的酶促反應(yīng)過(guò)程。乙?;D(zhuǎn)移酶可以將乙?;鶊F(tuán)(CH3C=O)從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)。同理,去乙?;竸t可以逆轉(zhuǎn)這種反應(yīng)。蛋白質(zhì)上的賴(lài)氨酸乙?;羌?xì)胞內(nèi)一種重要的PTMs過(guò)程。不僅發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等上,在細(xì)胞質(zhì)和線粒體中也存在著諸多蛋白的乙酰化修飾。在植物研究領(lǐng)域內(nèi),乙?;揎椫饕獏⑴c植物光合作用、生長(zhǎng)發(fā)育、脅迫響應(yīng)等過(guò)程。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,乙?;揎椏烧{(diào)節(jié)人體內(nèi)某種代謝酶,控制糖尿病,這一發(fā)現(xiàn)為糖尿病干預(yù)與療理帶來(lái)新的希望。貴州乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):檢測(cè)特異性高。
蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過(guò)程,并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能,對(duì)于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點(diǎn):時(shí)間快,周期短;識(shí)別位點(diǎn)準(zhǔn)確,采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準(zhǔn)確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點(diǎn)。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類(lèi)型。
根據(jù)不同的作用位點(diǎn),蛋白質(zhì)乙酰化修飾分為:發(fā)生在蛋白N端的乙?;揎棥l(fā)生在蛋白賴(lài)氨酸上的乙?;揎?。前者發(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對(duì)于新生蛋白的成熟和細(xì)胞定位非常重要,由N乙酰轉(zhuǎn)移酶(NATs)負(fù)責(zé);而后者是一個(gè)可逆的過(guò)程,主要由賴(lài)氨酸乙?;福↘ATs)和賴(lài)氨酸去乙?;福↘DACs),賴(lài)氨酸的乙酰化修飾是我們目前研究的重點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾應(yīng)用領(lǐng)域:應(yīng)用在食品工業(yè)方面,通過(guò)人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質(zhì)的改性,以改善蛋白質(zhì)品質(zhì)。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質(zhì)的功能和相關(guān)代謝途徑的調(diào)控。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,蛋白質(zhì)的磷酸化紊亂,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控異常,因此,病理的形成與蛋白質(zhì)的磷酸化異常也有很大相關(guān)性。其分子機(jī)制問(wèn)題對(duì)于病癥等重大疾病的研究具有相當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)意義,這也是指當(dāng)之無(wú)愧地成為生物學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。目前對(duì)乙酰化修飾的功能研究主要集中在對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對(duì)代謝通路的調(diào)控這兩個(gè)方面。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組產(chǎn)品介紹:泛素化修飾(Ubiquitylation)是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是指一個(gè)或多個(gè)泛素分子(Ubiquitin,由76個(gè)氨基酸組成的多肽)在一系列特殊的酶作用下,將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類(lèi),從中選出靶蛋白分子,并對(duì)靶蛋白進(jìn)行特異性修飾的過(guò)程。 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物80%~85%的蛋白質(zhì)降解。除參與蛋白質(zhì)降解之外,泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期、增殖、細(xì)胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控。泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來(lái)生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,它已然成為研究、開(kāi)發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。武漢蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式
蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。北京甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法
定量N-糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類(lèi)糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專(zhuān)一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來(lái)。北京甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法