電鏡診斷法,采用電子顯微鏡,可以直接觀察病原顆粒的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)。自1977-1978年間電鏡與超薄切片技術(shù)在柑橘黃龍病病樹葉片的篩管細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)病原BLO以來,在中國,電鏡便成為診斷黃龍病的一個(gè)重要手段。采用癥狀明顯、老熟的葉片為材料,用側(cè)脈代替中代替中脈和縱切代替橫切韌皮部制樣等改進(jìn)方法,可有效地提高電鏡對(duì)BLO的檢出率。FBA染色液是有百分之一堿性品紅水溶液和百分之一無水對(duì)氨基本磺酸溶液按1:1的比例混合,再稀釋一定的倍數(shù)成為染色工作液。取染病的葉片用自來水和蒸餾水洗凈,用徒手切片法橫切,切片移至滴有FBA染色工作液的載玻片上染色5-8min,在光學(xué)顯微鏡下可觀察到其外向韌皮部篩管細(xì)胞中存在被染成紅褐色的病原細(xì)菌,多為桿狀,有些呈長橢圓形。但是這種檢測(cè)方法的穩(wěn)定性不好,對(duì)選取材料和切片的厚度要求都很高。病樹處理欠科學(xué),忽視砍前、砍后工作,并沒有真正做到去除病原。柳州皇帝柑黃龍病辨別
發(fā)病規(guī)律:黃龍病的病源是類菌原體,主要通過苗木調(diào)運(yùn)和帶病接穗進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播,使無病的橘園成為病區(qū)。柑桔園內(nèi)主要通過木虱和其它傳病昆蟲(如橘蚜)進(jìn)行傳播。其發(fā)病率和病情輕重與許多因素有關(guān):柑桔園內(nèi)病樹多、木虱量大時(shí),黃龍病的發(fā)生量就大;幼樹易感病,中成年樹較耐??;樹勢(shì)強(qiáng)的抗病力強(qiáng),樹勢(shì)弱的易感??;春梢發(fā)病輕,夏秋梢發(fā)病重;柑、橘、橙、柚類都可感病,但柑桔等耐病力弱、感病后衰退快,而柚類、橙類耐病力較強(qiáng)。桂林紐荷爾黃龍病辨別木虱能傳菌有兩個(gè)必要條件,其一,木虱需要帶菌;其二,木虱傳毒是需要一定時(shí)間的。
柑橘黃龍病又稱為“桔病”。由一種稱為韌皮部桿菌引起的細(xì)菌病害,通過嫁接苗木和一種稱為柑橘木虱的昆蟲進(jìn)行傳播,對(duì)柑橘造成的危害極大。黃龍病的防控技術(shù),1.加強(qiáng)植物檢疫,嚴(yán)禁帶病苗木和接穗的引入傳播。2.建立無病苗圃,培育無病苗木,一律采用無病苗種植。3.及時(shí)挖除發(fā)病樹。對(duì)每年春、秋兩個(gè)梢期,尤其是秋梢期,一旦發(fā)現(xiàn)病株或可疑病株,立即挖除集中燒毀。挖除病株前應(yīng)對(duì)病樹及附近植株噴灑有機(jī)磷藥劑,以防柑橘木虱從病樹向周圍轉(zhuǎn)移傳播。發(fā)病輕的柑橘園,挖除病株后可用無病苗補(bǔ)植。
PCR鑒定,自Villechanoux等發(fā)表發(fā)柑橘黃龍病病原的部分DNA序列以來,PCR檢測(cè)黃龍病的技術(shù)得到了有效發(fā)展。常用的PCR技術(shù)有常規(guī)PCR、定量PCR和巢氏PCR(nested-PCR)三種。1.常規(guī)PCR技術(shù)Jagoueix、hocquellet等采用常規(guī)PCR技術(shù)分別對(duì)黃龍病亞洲種和非洲種進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)常規(guī)PCR技術(shù)比較好的區(qū)分兩種病原。丁芳等(2004)利用常規(guī)PCR技術(shù)檢測(cè)了田間和廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所幾個(gè)感黃龍病品種,發(fā)現(xiàn)其可以檢測(cè)出未顯癥狀的黃龍病的材料。2.定量PCR是指PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。定量PCR技術(shù)不僅可以檢測(cè)到黃龍病病原,同時(shí)可以檢測(cè)出病原含量多少。田亞南等(1996)報(bào)道,運(yùn)用定量PCR檢測(cè)技術(shù),在木虱體內(nèi)病原含量多,其次為長春花,而柑橘中病原體相對(duì)少。均勻黃化病樹多枝新稍葉片不轉(zhuǎn)綠而呈現(xiàn)均勻黃化,出現(xiàn)在出發(fā)病樹和夏秋稍上,呈現(xiàn)均勻的淡黃綠色、易脫落。
病害流行條件苗木帶病率、田間病株率及介體木虱的種群數(shù)量是黃龍病發(fā)生流行的主要因素。黃龍病的發(fā)生流行與氣象條件有比較重要關(guān)系。栽培管理和植物保護(hù)措施是影響黃龍病發(fā)生的重要因素。良好的生態(tài)條件有利阻止病害蔓延。緯度與海拔:高緯度地區(qū)發(fā)生很少即使發(fā)病后損失也比較小,蔓延慢。不同種類和品種的柑橘樹抗病或耐病性有差異。癥狀鑒別癥狀鑒別是比較簡便的,也是比較直接的一種診斷方法??赏ㄟ^黃龍病發(fā)病癥狀觀察進(jìn)行初步診斷。黃龍病真的沒辦法治嗎?桂林紐荷爾黃龍病辨別
龍病癥狀的花是怎樣的?柳州皇帝柑黃龍病辨別
黃龍病的鑒別方法,研究認(rèn)為,“紅鼻子果”和斑駁黃化葉片是相當(dāng)有有特征的癥狀,可作為形態(tài)學(xué)鑒定柑橘黃龍病的主要依據(jù)。指示植物法,是利用病原在其他植物上表現(xiàn)癥狀的特征,作為鑒別病毒種類的標(biāo)準(zhǔn),這種用來產(chǎn)生癥狀的寄主稱為指示植物,又稱鑒別寄主。指示植物分為2種類型;一種在接種后產(chǎn)生系統(tǒng)的癥狀,并擴(kuò)展到未接種部位;另一種只在接種部位產(chǎn)生局部病斑。Bove和柯沖分別把柑橘青果病原BLO和柑橘黃龍病原BLO用菟絲子傳到長春花上。發(fā)病大長春花往往是個(gè)別枝條先發(fā)病,然后其他枝條才陸續(xù)發(fā)病,發(fā)病枝條葉片起初局部黃化,然后沿葉邊緣變黃,中脈附近葉肉成綠色,花變小。這樣可證明草地菟絲子所傳遞的就是柑橘黃龍病的病原BLO,所以可以用菟絲子和長春花檢測(cè)柑橘黃龍病。這種方法簡便易行,成本低,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。但所需時(shí)間長,大量樣品的檢測(cè)比較困難。柳州皇帝柑黃龍病辨別
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