二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷，需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累，存在較大的主觀性。實(shí)際上，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降；打開培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值：H2O+CO2→H2CO3H++HCO3－NaHCO3Na++HCO3－此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低，在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH~。高濃度的HEPES可能對細(xì)胞**性作用，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10～25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中，大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對滲透壓有一定耐受性。研究顯示。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)，支持細(xì)胞增殖。湖南RPMI1640培養(yǎng)基價(jià)目表

    在s3中，將s2中消毒的外植體接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為ms+，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的ph值為，在s4中，將s3中的無菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基的配方為ms+～～，增殖培養(yǎng)基的ph值為，在s5中，將s4中的繡球組培苗放入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為1/2ms+～～，生根培養(yǎng)基ph值為。通過采用上述技術(shù)方案，通過液體**培養(yǎng)技術(shù)，以芽為原材料，獲取方便，增殖倍率高達(dá)8～10倍，生根率達(dá)到95％以上，苗木規(guī)格整齊，性狀保持穩(wěn)定，同時(shí)節(jié)省成本，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量繡球種苗。誘導(dǎo)培養(yǎng)基萌芽率能達(dá)到90％，可以成功建立無菌再生體系。使用本增殖培養(yǎng)基，繡球組培苗增殖倍率能夠達(dá)到8～10倍，組培苗高度一致，生長健壯。使用本生根培養(yǎng)基，繡球組培苗生根率能夠達(dá)到95％，根系發(fā)達(dá)，健壯，可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為：在s3中，將s2中消毒的外植體接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強(qiáng)度1500lux條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)6～8周。通過采用上述技術(shù)方案，在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免誘導(dǎo)培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，植物材料能夠快速適應(yīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基。西藏MEM a培養(yǎng)基供應(yīng)商家MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長所需的基本環(huán)境。

    人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞生長和繁殖。組成及作用氨基酸：組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同的細(xì)胞對氨基酸的需求各異，但幾種必需氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，如組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來。絕大部分細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，因?yàn)楣劝滨０肥亲鳛槟茉醇疤荚次镔|(zhì)同時(shí)被細(xì)胞利用，是是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長不良而死亡，所以各種培養(yǎng)液中都含有較多的谷氨酰胺。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。維生素：維持細(xì)胞生長的一種生物活性物質(zhì)，對細(xì)胞代謝有重大作用。它們在細(xì)胞中大多形成酶的輔基或輔酶，沒有它們，酶便沒有活性，代謝活動將無法進(jìn)行。維生素分為水溶和脂溶兩大類，的培養(yǎng)液中直接采用ATP和輔酶A。葡萄糖：大部分培養(yǎng)基都以葡萄糖作為能量來源之一。無機(jī)鹽：維持培養(yǎng)基滲透壓平衡，參與細(xì)胞的代謝活動。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。Na+是細(xì)胞外液中**主要的陽離子，對維持滲透壓的恒定有決定性的作用。

    才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助營養(yǎng)物質(zhì)等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細(xì)胞的主要成份，也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細(xì)胞對水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過純化，品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長，主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來源，因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí)，細(xì)胞主要通過擴(kuò)散作用吸收葡萄糖，細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動力；在葡萄糖濃度較低時(shí)，主要由鈉離子推動的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。RPMI1640培養(yǎng)基確保了細(xì)胞的高效生長。

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方（g/L）天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用**分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。其***是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種**提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。F12培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，支持細(xì)胞的生長。北京Ham's F12培養(yǎng)基聯(lián)系方式

無酚紅培養(yǎng)基適用于對酚紅敏感的實(shí)驗(yàn)。湖南RPMI1640培養(yǎng)基價(jià)目表

    第三節(jié)**的代謝與培養(yǎng)基新陳代謝(metabolism)足生物有機(jī)體基本的特征之一，是生命活動中一切生化反應(yīng)的總稱。它包括物質(zhì)的分解和物質(zhì)的合成過程。**吸收了外界的營養(yǎng)，在酶的作用下將其分解，再在酶的作用下臺成**菌體的成分。分解與合成兩個(gè)過程伴同發(fā)生，緊密相關(guān)，維持了**細(xì)胞的生命，進(jìn)行**的生長。通過檢測**系統(tǒng)及代謝產(chǎn)物的生理，來鑒定**的試驗(yàn)稱生化試驗(yàn)。生化試驗(yàn)可分為糖代謝試驗(yàn)、蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、鹽利用試驗(yàn)和呼吸酶類斌驗(yàn)4種。l.代謝試驗(yàn)①氧化發(fā)酵試驗(yàn)O-F；②糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn)；③VP和甲基紅試驗(yàn)2.蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)①蛋白水解試驗(yàn)；②硫化氫試驗(yàn)；③吲哚試驗(yàn)；④脫羧酶試驗(yàn)；③脫氨試驗(yàn)；⑥尿素酶試驗(yàn)。3.鹽類代謝試驗(yàn)①枸櫞酸鹽試驗(yàn)；②丙二酸鹽利用試驗(yàn)；③硝酸鹽還原試驗(yàn)4．呼吸酶類試驗(yàn)①氧化酶試驗(yàn)；②細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)表IMVIC試驗(yàn)對腸桿菌屬的鑒別作用菌名吲哚（I）甲基紅（M）VP（Vi）枸櫞酸鹽。湖南RPMI1640培養(yǎng)基價(jià)目表