體外動物細(xì)胞培養(yǎng)時需要大量谷氨酰胺,利用量常超過其他必須氨基酸利用量的總和。維生素是維持細(xì)胞生長的生物活性物質(zhì),在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類,水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等;脂溶性維生素主要包括維生素A、D、E、K等;有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A;大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分,沒有它們,酶便沒有活性,代謝活動將無法進(jìn)行。比如,泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成;d體蛋白和輔酶(如輔酶A),參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng);維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如,DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍,其原因是一方面不同種類維生素的作用不同,另一方面不同種類的細(xì)胞對維生素的需求也可能有較大差異,相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。無機鹽是細(xì)胞維持生命活動所不可缺少的營養(yǎng)成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43一、SO42一、HCO3-等,主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡。無酚紅培養(yǎng)基減少了酚紅對細(xì)胞的影響。四川Ham's F12培養(yǎng)基
但其引入的尿素和**銨成分含量過高,這對多種植物生長不利;cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開了一種無硝酸培養(yǎng)基,獲得較好的培養(yǎng)效果,但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑;cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,可提高植物組培成功率,但引入了易制爆試劑硝酸鈉,且其*適用于植物離體培養(yǎng),不具有通用性。此外,現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基,包括ms、b5、n6以及其他公開的植物**培養(yǎng)基,它們被用于配制液體培養(yǎng)基時的ph值波動大,在用于植物水培時均需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,耗費時間。因此,急需一種既無硝酸銨、也不引入新的易制爆成分,并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當(dāng)或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術(shù)實現(xiàn)要素:有鑒于此,本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下,去除了市場禁止流通的易制爆成分nh4no3,且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基,以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術(shù)問題。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。天津F12培養(yǎng)基是什么使用減血清培養(yǎng)基可以減少細(xì)胞培養(yǎng)中的血清干擾因素。
CD3-CD56+:50%-90%NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)基制劑制備過程中,需要對細(xì)胞進(jìn)行3次清洗,在大量的實驗中會發(fā)現(xiàn),在清洗細(xì)胞的過程中往往會損失大量細(xì)胞,少則30%多則50%。友康研**細(xì)胞回收液干細(xì)胞溫和消化酶專門用于干細(xì)胞的消化,包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,胚胎干細(xì)胞(ES)等。消化作用其溫和,對細(xì)胞的干細(xì)胞溫和消化酶(500mL/瓶)T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基可用于Car-T細(xì)胞的培養(yǎng)。培養(yǎng)時可不添加任何自體血漿。T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基用于HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)及重組蛋白的表達(dá),HEK293蛋白表達(dá)無血清培養(yǎng)基成分明確,比較大細(xì)胞密度可達(dá)7×10E6cells/mHEK293蛋白表達(dá)無血清培養(yǎng)基GMP級細(xì)胞凍存液不含蛋白、不含DMSO,化學(xué)成分明確。是可作為細(xì)胞*物*用輔料的凍存液。GMP級細(xì)胞凍存液友康生物免*細(xì)胞無血清培養(yǎng)基(CIK),用于單核細(xì)胞向CIK細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及體外大規(guī)模擴增培養(yǎng)。免*細(xì)胞無血清培養(yǎng)基用于懸浮HEK293細(xì)胞(如293T、293S、293F、293A等)的連續(xù)培養(yǎng)以及外源基因的瞬時表達(dá),尤其在包裝慢**過程中表HEK293全懸浮無血清培養(yǎng)基CHO無血清培養(yǎng)基,無血清,低蛋白;采用批次培養(yǎng),CHO比較大生長密度可達(dá)9E6cells/mL。
nh4)2so4264mg、nh4h2po4288mg、mgso4·7h2o370mg、cacl2332mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、煙酸2mg、鹽酸硫胺素7mg、鹽酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。將本實施例中的廣適性植物**培養(yǎng)基命名為cs基本培養(yǎng)基。實施例二,本實施例廣適性植物**1/2培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno31331mg、(nh4)2so4132mg、nh4h2po4144mg、mgso4·7h2o185mg、cacl2166mg、mnso4·h2o15mg、znso4·7h2o4mg、h3bo33mg、cocl2·、cuso4·、na2moo4·、nafeedta37mg、肌醇100mg、煙酸2mg、鹽酸硫胺素7mg、鹽酸吡哆醇1mg、甘氨酸2mg。將本實施例中的廣適性植物**1/2培養(yǎng)基命名為1/2cs基本培養(yǎng)基。上述實施例中的cs基本培養(yǎng)基、1/2cs基本培養(yǎng)基與現(xiàn)有ms基本培養(yǎng)基及1/2ms基本培養(yǎng)基的成分對比如表1所示:表1ms、cs、1/2ms、1/2cs基本培養(yǎng)基成分表上述實施例中的cs基本培養(yǎng)基和1/2cs基本培養(yǎng)基,若應(yīng)用于植物**培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基制作,可根據(jù)實際需要添加包含但不限于適量***、蔗糖、葡萄糖、白糖、瓊脂、植物凝膠、卡拉膠、大量元素水溶肥等,添加量同ms培養(yǎng)基一致,調(diào)節(jié)ph至,121℃15min滅菌后搖勻分裝。無血清培養(yǎng)基有助于維持細(xì)胞的純凈生長環(huán)境。
將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導(dǎo)實驗;b、**消毒:于無菌環(huán)境下,將挑選的種子置于無菌三角瓶中,用無菌水清洗3-5次,75%酒精搖動清洗5min,無菌水清洗3-5次,5%naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),清水洗3-5次,種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基:cs基本培養(yǎng)基+,用超純水溶解,。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導(dǎo)方法:用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)基,胚貼于培養(yǎng)基表面;于溫度24-26℃、濕度50-70%、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時,經(jīng)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。對比培養(yǎng)例7:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例7,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時,經(jīng)ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。無酚紅培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的高度準(zhǔn)確性。湖北Ham's F12培養(yǎng)基進(jìn)口
RPMI1640培養(yǎng)基確保了細(xì)胞的高效生長。四川Ham's F12培養(yǎng)基
在工作臺上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75%酒精中消毒30s,用無菌水沖洗3~4次,使用白貓漂白水和無菌水按1:4的體積比配制消毒液,將外植體放入消毒液浸泡40min。通過采用上述技術(shù)方案,這種方式對外植體消毒方法簡單,能夠**降低外植體的死亡率,消毒成活率較高。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為:在s1中,外植體選擇為**繡球的枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分。綜上所述,本發(fā)明包括以下至少一種有益技術(shù)效果:本發(fā)明通過液體**培養(yǎng)技術(shù),以芽為原材料,獲取方便,增殖倍率高達(dá)8~10倍,生根率達(dá)到95%以上,苗木規(guī)格整齊,性狀保持穩(wěn)定,同時節(jié)省成本,適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量繡球種苗。附圖說明圖1是繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法的流程示意圖。具體實施方式以下結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實施例:參照圖1,為本發(fā)明公開的一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法,具體步驟如下:(一)、試驗材料:供試材料采自江蘇東郁植物科技有限公司苗圃的**繡球,品種為無盡夏(endlesssummer“bloomstruck”),外植體選用當(dāng)年生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分。(二)、試驗方法:繡球**培養(yǎng)過程按以下步驟進(jìn)行:初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)。。四川Ham's F12培養(yǎng)基