南京正揚生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測試劑盒的優(yōu)點有哪些?①操作簡單:樣品操作十分簡便,無需自配試劑,且樣品無需離心富集,節(jié)省大量時間;②樣品需求量少:只需500uL樣品進行前處理即可,無需進行樣品離心富集。③檢測用時較短:蕞快2h即可出結(jié)果,是CGT領域客戶的優(yōu) 選;④合規(guī)驗證:整個檢測體系(包括提取和檢測)由全球蕞大第三方實驗室Eurofins權(quán) 威認證,驗證報告具備公正性、權(quán) 威性,符合中、美、日、歐申報要求;被污染的細胞如何做支原體檢測?深圳肺炎支原體檢測廠家
qPCR法支原體檢測試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結(jié)果分析四個環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室,注意分區(qū)操作,降低實驗發(fā)生污染的風險。用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象,該問題是由反應管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉,反應結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設備硬件相關,需咨詢硬件供應商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象:可能與ROX加入量不足相關,個別設備有ROX校正功能,不同型號設備對ROX的需求量會有差異,需設置實驗摸索合適的ROX加入量。泰州快速支原體檢測常見問題qPCR法支原體檢測的流程。
常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽性,因為在培養(yǎng)時需以陽性菌株為對照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對實驗室條件要求比較高。
qPCR法支原體檢測程序中,陰性對照(NCS)和空白對照(BLK)的區(qū)別:陰性對照(NCS):為樣品稀釋液經(jīng)核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC,NCS用于監(jiān)測提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況;空白對照(BLK):在PCR檢測環(huán)節(jié)加入的對照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監(jiān)測檢測環(huán)節(jié)是否出現(xiàn)污染,如:檢測試劑盒污染、試劑配制間的環(huán)境污染等;南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠,且能提供國際第三方檢測機構(gòu)出具的性能驗證報告,符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動化提取,自動化提取試劑盒又包括預分裝和非預分裝規(guī)格,客戶可根據(jù)實際情況進行訂購。qPCR法支原體檢測的優(yōu)點有哪些?
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①實驗時應注意防止外源DNA對試劑的污染,先加樣品DNA,然后進行陽性質(zhì)控品的操作。在制備反應試劑和添加DNA模板時,使用帶濾芯的搶頭,添加不同的試劑和不同的樣本時需更換搶頭,并經(jīng)常更換手套;②PCR實驗室應具有3個不同的分區(qū),分別為試劑準備間、樣本制備間、擴增間。3個分區(qū)應存在壓力差,試劑準備間>樣本制備間>擴增間;南京正揚的支原體檢測試劑盒能檢測哪些支原體型別?杭州快速支原體檢測試劑盒
中國藥典對支原體檢測的要求。深圳肺炎支原體檢測廠家
用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么?①陰性質(zhì)控或無模板對照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,考慮環(huán)境存在污染所致,建議對實驗環(huán)境做好控制,如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管,保證實驗分區(qū)(樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴增區(qū))、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,在確保陰性質(zhì)控或無模板對結(jié)果正常的情況下,可以進行復測,復測結(jié)果一致,則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。深圳肺炎支原體檢測廠家