轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)都是獲得基因表達情況的重要工具,從生物學(xué)角度上看,轉(zhuǎn)錄組表示了基因表達的中間狀態(tài),可以反映諸如轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的機理;而蛋白質(zhì)是生物體直接的功能執(zhí)行者,因而對其表達水平的研究有著不可替代的優(yōu)勢。要探究生物體疾病機理、脅迫機制,精確研究重要基因的表達模式和調(diào)控機理,只有聯(lián)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)表達量數(shù)據(jù)對生物樣本進行系統(tǒng)研究,才能真正觀察到mRNA-蛋白質(zhì)關(guān)聯(lián)性,進而從整體上解釋生物學(xué)問題。單細胞多組學(xué)測序技術(shù)是在單細胞分辨率下精確分析細胞異質(zhì)性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù)。北京single cell 單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面,需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進行透化處理,使細胞中的mRNA釋放,并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測序文庫進行上機測序,從而獲取基因表達信息??傮w來說,空間轉(zhuǎn)錄組的實驗流程包括:組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序,而需要客戶進行樣本準備的步驟相對簡單:組織凍存與OCT包埋。廈門烈冰科技單細胞多組學(xué)測序價格在單細胞組學(xué)技術(shù)的支持下,早期妊娠母胎界面的異質(zhì)性問題得到了更深入的闡述與理解。
基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍,保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP:1)堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團,用于區(qū)分ATCG;2)3端使用疊氮基團封閉,保證一次循環(huán)只上一個dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時,會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像,再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團,開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點的熒光,實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控,隨著循環(huán)數(shù)的增大會出現(xiàn)不同步的情況,因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。
BDRhapsody單細胞分選系統(tǒng)集成了熒光顯微成像系統(tǒng),可以對不同熒光標記的細胞進行檢測并計數(shù)。在進行質(zhì)量評估之前,首先要將細胞的培養(yǎng)體系更換成上機所需的Buffer。在這個過程中,需要進行多次離心、重懸操作,烈冰Novelbio單細胞實驗團隊推薦采用水平轉(zhuǎn)子離心機來進行這步操作。這種離心機可以有效減少細胞在多次更換Buffer過程中的損失,尤其是對于細胞量較少的樣本來說,顯得非常有必要。更換完Buffer之后,還需要將細胞進行過篩操作,去除較大的細胞團,獲得較為純凈的單細胞懸液。烈冰生物首批引進 Chromium X 平臺,開啟百萬級通量單細胞測序新時代。
烈冰生物已空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)提供從一個組織切片樣本中獲取包括空間信息在內(nèi)的全部轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從而可以區(qū)分和定位功能基因在特定組織區(qū)域內(nèi)的活躍表達。其可以檢測組織樣本中的所有基因活動,并繪制活動發(fā)生的位置,這將有助于科學(xué)家更好地構(gòu)建生物圖譜,并進一步理解疾病和生物學(xué)過程。目前,空間轉(zhuǎn)錄組主要應(yīng)用于多種疾病、免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理學(xué)等研究領(lǐng)域。烈冰生物具有專業(yè)的實驗團隊、豐富的切片經(jīng)驗,配置了國際主流的儀器設(shè)備,實驗團隊針對不同組織類型優(yōu)化完善實驗方案,并制定了嚴謹規(guī)范的實驗室SOP流程,保證空間轉(zhuǎn)錄組切片的質(zhì)量,全優(yōu)保障測序數(shù)據(jù)質(zhì)量。單細胞測序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對于低豐度信號影響的問題。青島烈冰生物單細胞多組學(xué)測序
未來,單細胞多組學(xué)測序技術(shù)的策略會繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展。北京single cell 單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術(shù),突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞,基于每個細胞分別建庫測序,獲得單個細胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達狀態(tài),并鑒定細胞的類型,可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,反映細胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲,系統(tǒng)實現(xiàn)16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細胞(不混樣),并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗,可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規(guī)模單細胞研究。北京single cell 單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
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