空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個階段:1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分;2.Spot點陣的分群與定義;3.Spot分群的功能與生物學(xué)價值。每一個部分都不可或缺,其結(jié)果都對后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的,都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細胞的原始數(shù)據(jù)過濾策略即可,左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負荷。隨后,采用10X官方的Spatialranger的策略進行后續(xù)分析,解析出位于空間位置中的有效的Spot表達矩陣。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際主流期刊研究文章發(fā)表。寧波烈冰單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
機體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”;當細胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時,往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,導(dǎo)致一些基因被“沉默”,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態(tài)細胞進行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態(tài)。擬時序分析,即根據(jù)不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況,構(gòu)建細胞譜系發(fā)育,但這里的時間并不是真時間,而是一個虛擬的時間,是指的細胞與細胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中,也會存在多種不同的細胞形態(tài)。因此,不論測定了多少樣本,我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉(zhuǎn)化和變化進行描述。合肥BD Rhapsody單細胞多組學(xué)服務(wù)機構(gòu)單細胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在,研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組,擴展到了基因組、免疫組、蛋白組等多組學(xué)水平。
當蜂巢孔內(nèi)同時落入細胞和磁珠后,接下去可以往BDCartridge板中加入細胞裂解液對細胞進行裂解,使細胞內(nèi)的RNA與磁珠上的標簽進行結(jié)合,完成每個細胞內(nèi)RNA的捕獲和標記。這時,再將捕獲了RNA的磁珠進行回收,待所有質(zhì)控結(jié)果確認通過后就可以進行后續(xù)的RNA反轉(zhuǎn)錄、cDNA第二鏈合成等實驗操作。而BDCartridge板則需要再進行一次成像,獲得磁珠收集后的掃描圖,判斷磁珠是否已經(jīng)被有效收集。根據(jù)每一步的質(zhì)控結(jié)果,烈冰科技(NovelBio)單細胞測序?qū)嶒瀳F隊會根據(jù)單細胞分選的實驗結(jié)果生成實驗總結(jié)報告,判斷每一步驟是否通過質(zhì)控,并得到捕獲的單細胞數(shù)量以及雙細胞比例,對整個實驗進行總結(jié)評估。若所有過程通過質(zhì)控,實驗樣本即可進行下一步實驗操作。
從單細胞測序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細胞類型的功能解析,越來越需要一種多組學(xué)的細胞生物學(xué)視角。通過單細胞多組學(xué)——即對不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個單細胞來源中檢測多種細胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達、細胞表面蛋白表達、免疫組庫序列(包括T細胞和B細胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時間)。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。單細胞多組學(xué)測序技術(shù)已應(yīng)用于心肌再生領(lǐng)域。
烈冰生信團隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺,可實現(xiàn)零代碼操作、簡單方便:單細胞瀏覽器的操作簡單,不需要命令行操作。簡單拖拽、設(shè)置參數(shù)即可運行,即使生信0基礎(chǔ)用戶也可以運用自如;可視化展示海量結(jié)果文件:可視化展示Cluster的基因數(shù),UMI數(shù)量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對應(yīng)的細胞數(shù)量、基因表達量、RNA表達量、樣本細胞分布、線粒體RNA表達量等;3D立體展示,文章動圖先人一步:單細胞瀏覽器針對t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結(jié)果進行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細胞分布和聚類情況。烈冰智造PanoCell單細胞捕獲,媲美國際主流的單細胞平臺。蘇州single cell RNA單細胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
目前單細胞多組學(xué)技術(shù)仍然處于技術(shù)探索及高通量開發(fā)階段,但應(yīng)用單細胞多組學(xué)分析是研究發(fā)展的必然趨勢。寧波烈冰單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
單細胞技術(shù)讓我們在基因組學(xué)、表觀基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等層面上解析了許多錯綜復(fù)雜的生命密碼。隨著科技的進步,我們發(fā)現(xiàn)整合多個組學(xué)的信息可以更仔細地觀察細胞之間的可變性,更清楚地識別特定細胞及其功能。單細胞多組學(xué)在臨床診斷、疾病分型以及細胞發(fā)展機制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用也將越來越廣。單細胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在,研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組,而是擴展到了基因組、免疫組、表觀組、蛋白組等多組學(xué)水平。寧波烈冰單細胞多組學(xué)技術(shù)支持
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