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通過對(duì)外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn):外泌體除了蛋白質(zhì),外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外,據(jù)報(bào)道,肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會(huì)增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會(huì)升高。研究表明,外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是,外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標(biāo)志物。對(duì)于進(jìn)行型退行型疾病,在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA,如:miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達(dá)水平。外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質(zhì),這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。鄭州外泌體分離多少錢
外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(biāo)(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號(hào))。電子顯微鏡分析:對(duì)于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進(jìn)行對(duì)比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行觀察。南京血液外泌體分離外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號(hào)和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。
外泌體的表征方法:根據(jù)藥物遞送系統(tǒng)(DDS)表征外泌體結(jié)構(gòu)至關(guān)重要,因?yàn)樗鼪Q定了DDS的特性,例如細(xì)胞或組織親和力、應(yīng)激反應(yīng)、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應(yīng)滿足的基本要求指南。在開發(fā)基于外泌體的DDS時(shí),必須考慮數(shù)量、大小、形態(tài)、膜組成和蛋白質(zhì)(包括受體)等參數(shù)。這些參數(shù)表征所用的技術(shù)主要為光學(xué)、非光學(xué)和微流體技術(shù)。外泌體的表征方法之非光學(xué)方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質(zhì)量量化和脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量的總體估計(jì)。使用TRPS,可以同時(shí)測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領(lǐng)域迅速發(fā)展,比如:粒度分析儀可以不只可以進(jìn)行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細(xì)胞外泌體的濃度、zeta電位、形態(tài)等進(jìn)行多維度檢測。
分離外泌體的方法之密度梯度超速離心:有助于根據(jù)尺寸、結(jié)構(gòu)和形態(tài)差異分離和分析納米級(jí)材料。DGUC“細(xì)化”分離的囊泡,并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養(yǎng)基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養(yǎng)基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜,用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養(yǎng)基中,并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質(zhì)聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過超速離心干擾較終分離的外泌體產(chǎn)物。DGUC有助于克服超速離心的局限性,并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細(xì)化和高性能外泌體分離方法中的應(yīng)用。簡而言之,在分離細(xì)胞碎片后,應(yīng)用1×105g用60%碘沙醇離心3小時(shí),然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時(shí)有助于形成多達(dá)12個(gè)碘沙醇梯度級(jí)分和兩個(gè)外泌體級(jí)分。超速離心使用連續(xù)的密度梯度或逐步梯度來較小化這些顆粒材料對(duì)外泌體的干擾。外泌體與肺的關(guān)系密切,通過氣道和肺泡微環(huán)境的打開和修飾,參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。
外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡,普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等體液中,具有細(xì)胞信使功能,參與細(xì)胞通訊。外泌體是目前為止定義較為明確的細(xì)胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其生成過程、釋放途徑、大小及功能區(qū)別于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小體(Apoptosisbodies)。外泌體是內(nèi)吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌體和脫落的囊泡都含有特定的蛋白質(zhì)組、RNA和,dsDNA等。不同的細(xì)胞外環(huán)境富含不同類型的細(xì)胞外囊泡。即使由相同的細(xì)胞類型形成,不同類別的囊泡也具有不同的核酸特征。分離外泌體的方法:細(xì)胞碎片、凋亡體、外泌體和其他EV一起存在于生物體液中,具有密度、形狀、大小和表面蛋白等物理性質(zhì)的外泌體是分離機(jī)制的基礎(chǔ)。結(jié)合兩種或多種分離方法有助于有效地將外泌體與其他干擾成分分離。外泌體的分離方法可能還存在一定的局限性和偏差。鄭州外泌體分離多少錢
的外泌體分離技術(shù)采用了磁珠分離和濾膜分離的方法。鄭州外泌體分離多少錢
外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用:外泌體保護(hù)miRNA免于降解,使它們比游離miRNA更穩(wěn)定,并能被特定受體細(xì)胞有效整合。因此,在外泌體攜帶的貨物中,miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細(xì)胞類型、靶標(biāo)和細(xì)胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明,疙瘩細(xì)胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進(jìn)疙瘩細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對(duì)于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要,因?yàn)樾卵芸梢蕴峁╊~外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),還可以清理廢物。比如:病細(xì)胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23;外-miR-29;exo-miR-103和exo-miR-210可以促進(jìn)增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。鄭州外泌體分離多少錢
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