5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力。這種活性通常用于修復(fù)受損的DNA或去除錯誤配對的核苷酸。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,幫助錯誤或不需要的序列,從而確保DNA的正確復(fù)制和修復(fù)。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成。聚合酶在合成新鏈時,5'-3'外切酶活性可以在發(fā)現(xiàn)錯誤時進行修正,確保合成的DNA鏈的準(zhǔn)確性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,可以在合成過程中去除錯誤的核苷酸,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,這使得它在某些應(yīng)用中更為穩(wěn)定,特別是在等溫擴增反應(yīng)中,如LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫擴增)和RCA(滾環(huán)擴增)等。Cpf1是一種新發(fā)現(xiàn)的類2/型V CRISPR-Cas DNA內(nèi)切酶,在不同系統(tǒng)中顯示出一系列的活性。Recombinant Human ABO Protein,hFc Tag
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)和它的大片段(LargeFragment)是兩種在分子生物學(xué)實驗中常用的酶。它們的主要區(qū)別在于結(jié)構(gòu)和活性:1.**結(jié)構(gòu)**:-完整的BstDNAPolymeraseI包含一個5'→3'的核酸外切酶活性區(qū)域,而大片段是通過基因工程改造或蛋白酶處理去掉了這個外切酶活性區(qū)域的酶。因此,大片段沒有5'→3'的核酸外切酶活性,但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性。2.**活性**:-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性,這意味著它在合成DNA的同時可以“校對”錯誤,切除不匹配的核苷酸。而大片段由于缺少外切酶活性區(qū)域,不具有這種校對能力。-大片段具有更強的鏈置換能力,這使得它非常適合于等溫擴增反應(yīng),如環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增(LAMP)和滾環(huán)擴增(RCA)。3.**應(yīng)用**:-BstDNAPolymeraseI由于具有校對功能,可能更適合于需要高保真度的DNA合成反應(yīng)。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其鏈置換能力,更適合于等溫擴增技術(shù),這些技術(shù)不需要熱循環(huán)儀,可以在恒定溫度下進行DNA擴增。4.**熱穩(wěn)定性**:-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的溫度下進行反應(yīng),而BstDNAPolymeraseI可能具有更寬的反應(yīng)溫度范圍。Recombinant Mouse IL-3 Protein泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標(biāo)記。
在PCR實驗中,除了BsuDNAPolymerase,還有幾種聚合酶適合高溫擴增,包括:1.**TaqDNAPolymerase**:這是常用的PCR聚合酶,來源于Thermusaquaticus,能夠在72°C的比較好活性溫度下工作。它具有良好的熱穩(wěn)定性,可以承受PCR的熱變性步驟,且中途不需要再添加酶。2.**PfuDNAPolymerase**:來源于Pyrococcusfuriosus,具有出色的熱穩(wěn)定性和3'→5'外切酶活性,提供校正功能,適用于對PCR保真性要求較高的實驗,如基因篩選、克隆表達、突變檢測、定點突變等。3.**VentDNAPolymerase**:來源于Litoralis棲熱球菌,具有3'→5'外切酶活性,可以去除錯配的堿基,具有校對功能,保真度比TaqDNAPolymerase高5~15倍。4.**KODDNAPolymerase**:來自Thermococcuskodakaraensis,具有高保真性和高熱穩(wěn)定性,保真性比PfuDNAPolymerase更高,優(yōu)化后的PCR反應(yīng)緩沖液能使得其擴增速度達到Taq酶的2倍、Pfu酶的5-6倍。5.**BstDNAPolymerase**:來源于Bacillusstearothermophilus,具有3'到5'外切割活性,適用于等溫擴增反應(yīng),如LAMP技術(shù),可在恒溫下進行DNA擴增,無需繁瑣的溫度循環(huán)。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內(nèi)切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應(yīng)用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)導(dǎo)致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標(biāo)效應(yīng)。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產(chǎn)物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)和T7核酸內(nèi)切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業(yè)上使用時成本較高,但它在大規(guī)模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)的應(yīng)用中。多泛素化的靶蛋白被26S蛋白酶體識別。26S蛋白酶體由一個20S顆粒和兩個19S調(diào)節(jié)顆粒組成。
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓?fù)洚悩?gòu)酶,具有以下功能和應(yīng)用:1.**功能**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性,能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環(huán)狀的正或負(fù)超螺旋DNA發(fā)生解超螺旋,形成含有較少的正或負(fù)超螺旋的雙鏈環(huán)狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(jié)(knotting)或解開繩結(jié)(unknotting),聯(lián)結(jié)互補的單鏈環(huán)狀DNA成為雙鏈環(huán)狀DNA。2.**應(yīng)用**:-作為一種DNA重組連接的新型工具酶,用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復(fù)、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術(shù)中,DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I同時具有限制酶和連接酶特性,其生物學(xué)功能是在復(fù)制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**:-用于DNA快速酶切流程,包括配制體系反應(yīng)液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**:-建議在-25~-15℃保存,有效期為3年。5.**注意事項**:-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止酶失活。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I因其獨特的功能,在分子生物學(xué)研究和基因工程中扮演著重要的角色。Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一種在DNA修復(fù)過程中起作用的酶,其主要功能是識別并去除DNA中的尿嘧啶堿基。Recombinant Human TECK/CCL25
FnCas12a在切割DNA時產(chǎn)生黏性末端,有助于提高同源定向修復(fù)(HDR)的效率。Recombinant Human ABO Protein,hFc Tag
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)來純化質(zhì)粒DNA的產(chǎn)品。它通常包括高性能納米磁珠和獨特的緩沖體系組合,通過裂解菌體后釋放的DNA,能夠有效地結(jié)合于磁珠表面,漂洗除雜后獲得高質(zhì)量的目的質(zhì)粒。以下是磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的一些主要特點和應(yīng)用:1.**快速簡便**:操作步驟簡單,無需多次離心,整個抽提過程通常只需20-25分鐘。2.**高得率和純度**:可以從1-5ml新鮮大腸桿菌菌液中分離純化2-20μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化得到的DNA質(zhì)量高,完整性好,OD260/280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/230比值大于2.0。3.**適用性廣**:適用于1-5mL小體積高通量菌液質(zhì)粒抽提,且抽提所得的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實驗。4.**自動化兼容**:可整合移液法自動化儀器和磁棒法自動化儀器進行高通量提取實驗。5.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。6.**成本效益**:相比傳統(tǒng)的離心柱法,磁珠法可以減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒,且操作更為簡便快捷。7.**操作靈活**:磁珠的使用量可靈活調(diào)節(jié),適合不同體積和濃度的樣品處理。Recombinant Human ABO Protein,hFc Tag