核酸內(nèi)切酶VIII(EndonucleaseVIII)和核酸內(nèi)切酶III(EndonucleaseIII)都是DNA修復(fù)酶,但它們之間存在一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**活性類型**:-**核酸內(nèi)切酶VIII**:具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。N-糖基化酶活性可以釋放受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,產(chǎn)生一個脫嘌呤(Apurinic,AP)位點(diǎn);AP裂解酶活性可以切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端,產(chǎn)生一個具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。-**核酸內(nèi)切酶III**:主要具有β裂解酶(β-lyase)活性,能夠切割DNA磷二酯骨架在AP位點(diǎn)處,但不具備δ裂解酶(δ-lyase)活性。2.**識別和切除的受損堿基**:-**核酸內(nèi)切酶VIII**:可以識別并切除包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲在內(nèi)的多種受損堿基。-**核酸內(nèi)切酶III**:主要識別和切除氧化性損傷的嘌呤堿基,如8-氧鳥嘌呤。3.**裂解酶活性**:-**核酸內(nèi)切酶VIII**:具有β和δ裂解酶活性,而**核酸內(nèi)切酶III**具有β裂解酶活性。這些區(qū)別決定了它們在DNA損傷修復(fù)中的作用和應(yīng)用范圍。
磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中回收特定DNA片段的實驗室工具。與傳統(tǒng)的柱純化方法相比,磁珠法具有多個優(yōu)勢:1.**操作簡便快捷**:磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的操作步驟通常包括凝膠的融化、DNA的結(jié)合、磁珠的洗滌和DNA的洗脫,整個過程可以在20分鐘內(nèi)完成。2.**高純度和高回收率**:磁珠法能夠穩(wěn)定、高效地從凝膠中回收DNA,純化所得的DNA可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測序、PCR、雜交等后續(xù)操作。通?;厥章蔬_(dá)到60-80%,對于200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。3.**適用性廣**:適用于100bp以上DNA片段的純化,對達(dá)到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。4.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。5.**靈活性**:可以根據(jù)實際狀況靈活調(diào)節(jié)磁珠用量,適應(yīng)不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,也可用于自動化工作站或核酸自動提取儀,實現(xiàn)高通量操作。Recombinant Human NKG2A&CD94 Protein,hFc,Flag TagFnCas12a包含約1300個氨基酸,含有RuvC-like結(jié)構(gòu)域,同時具有DNA和RNA內(nèi)切酶的活性。
pA-MNase(蛋白A-微球菌核酸酶)在以下實驗中特別有用:1.**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:這是一種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),pA-MNase在此技術(shù)中用于在免疫沉淀后切割染色質(zhì)DNA,以分析特定蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合位點(diǎn)。2.**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:這是一種蛋白質(zhì)-基因組互作研究技術(shù),pA-MNase在此技術(shù)中用于在目標(biāo)蛋白質(zhì)被抗體識別后,通過核酸酶活性切割附近的DNA,從而釋放與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的DNA片段。CUT&RUN技術(shù)相比傳統(tǒng)的ChIP-Seq具有實驗周期短、信噪比高、可重復(fù)性好以及細(xì)胞投入量低的優(yōu)勢,尤其適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、**以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。3.**染色質(zhì)免疫沉淀實驗**:pA-MNase在染色質(zhì)免疫沉淀實驗中用于染色質(zhì)片段化,它在核小體間DNAlinker上進(jìn)行切割保持了核小體的完整性,并且由于其溫和的酶解條件,消除了超聲功率的可變性和超聲過程中染色質(zhì)乳化所帶來的負(fù)面影響。4.**去除核酸污染**:pA-MNase也可用于去除細(xì)胞裂解液中的核酸,以減少樣品的粘度,這對于后續(xù)的蛋白質(zhì)分析實驗尤為重要。
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓?fù)洚悩?gòu)酶,具有以下功能和應(yīng)用:1.**功能**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性,能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環(huán)狀的正或負(fù)超螺旋DNA發(fā)生解超螺旋,形成含有較少的正或負(fù)超螺旋的雙鏈環(huán)狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(jié)(knotting)或解開繩結(jié)(unknotting),聯(lián)結(jié)互補(bǔ)的單鏈環(huán)狀DNA成為雙鏈環(huán)狀DNA。2.**應(yīng)用**:-作為一種DNA重組連接的新型工具酶,用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復(fù)、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術(shù)中,DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I同時具有限制酶和連接酶特性,其生物學(xué)功能是在復(fù)制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**:-用于DNA快速酶切流程,包括配制體系反應(yīng)液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**:-建議在-25~-15℃保存,有效期為3年。5.**注意事項**:-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止酶失活。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I因其獨(dú)特的功能,在分子生物學(xué)研究和基因工程中扮演著重要的角色。在cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)中,Ultra-Long Master Mix 可以用來擴(kuò)增5'和3'末端的長片段cDNA。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對磁場響應(yīng)迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實驗,如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構(gòu)建等。5.**操作簡便**:整個抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實驗的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超過80%。
泛素化蛋白隨后被靶向到26S蛋白酶體進(jìn)行降解,或出現(xiàn)蛋白位置或活性變化。Recombinant Human DLK1 Protein,His Tag
T5核酸外切酶(T5Exonuclease)具有以下特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用:1.**降解方向**:T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解雙鏈或單鏈DNA。2.**起始消化位置**:T5核酸外切酶既能從單鏈或雙鏈DNA的5'末端起始消化,也可以從線性或環(huán)狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化。3.**對超螺旋雙鏈DNA的作用**:T5核酸外切酶無法降解超螺旋雙鏈DNA。4.**單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性**:T5核酸外切酶還具有單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-用于Gibson組裝,這是一種在恒溫條件下有效連接帶有多個重疊序列片段的技術(shù)。-從完全連接的環(huán)狀雙鏈DNA中去除不完全連接產(chǎn)物。-降解堿裂解質(zhì)粒提取方法中產(chǎn)生的變性DNA,增加超螺旋DNA比例,提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。-降解質(zhì)粒樣品中污染的線性化和切刻DNA。6.**操作條件**:推薦在37℃溫育30分鐘,之后加入EDTA至終濃度為20mM終止反應(yīng)。7.**儲存條件**:-25~-15℃保存,有效期3年。8.**注意事項**:避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止本品失活。這些特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用使得T5核酸外切酶在分子生物學(xué)實驗中,尤其是在DNA克隆和基因片段組裝中,具有重要的應(yīng)用價值。Recombinant Human DLK1 Protein,His Tag