Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein

來源: 發(fā)布時間:2024-11-23

提取的DNA質(zhì)量評估通常涉及以下幾個方面:1.**純度評估**:-**分光光度法**:通過測量DNA樣本在260nm和280nm處的吸光度(OD值)來評估DNA的純度。純度可以通過OD260/OD280的比值來評估,對于純DNA,這個比值通常在1.8左右。如果比值低于1.8,可能表明存在蛋白質(zhì)污染;如果高于1.9,則可能存在RNA污染。此外,OD260/OD230的比值可以用來評估鹽離子等雜質(zhì)的殘留,純DNA的比值應(yīng)在2.0-2.2之間。-**瓊脂糖凝膠電泳法**:通過電泳分離DNA片段,根據(jù)DNA在凝膠上的遷移情況來評估其純度。如果泳道口中存在較亮的條帶,可能表明存在蛋白污染。2.**濃度評估**:-**紫外分光光度計**:使用紫外分光光度計測定DNA在260nm處的吸光度,根據(jù)比爾-朗伯定律(Beer-Lambertlaw)計算DNA的濃度。對于純DNA,OD260的讀數(shù)為1.0時,大約相當(dāng)于50μg/mL的雙鏈DNA。-**熒光定量法**:使用熒光染料結(jié)合DNA,通過測量熒光變化來定量DNA。這種方法比紫外分光光度法更敏感、精確,并且可能對特定的核酸有特異性。

Cas12a不僅具有順式切割活性,還具備獨(dú)特的反式切割活性,這使得它能夠無差別地裂解附近的單鏈DNA。Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein,His Tag

Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

T5核酸外切酶(T5Exonuclease)具有以下特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用:1.**降解方向**:T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解雙鏈或單鏈DNA。2.**起始消化位置**:T5核酸外切酶既能從單鏈或雙鏈DNA的5'末端起始消化,也可以從線性或環(huán)狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化。3.**對超螺旋雙鏈DNA的作用**:T5核酸外切酶無法降解超螺旋雙鏈DNA。4.**單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性**:T5核酸外切酶還具有單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-用于Gibson組裝,這是一種在恒溫條件下有效連接帶有多個重疊序列片段的技術(shù)。-從完全連接的環(huán)狀雙鏈DNA中去除不完全連接產(chǎn)物。-降解堿裂解質(zhì)粒提取方法中產(chǎn)生的變性DNA,增加超螺旋DNA比例,提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。-降解質(zhì)粒樣品中污染的線性化和切刻DNA。6.**操作條件**:推薦在37℃溫育30分鐘,之后加入EDTA至終濃度為20mM終止反應(yīng)。7.**儲存條件**:-25~-15℃保存,有效期3年。8.**注意事項(xiàng)**:避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止本品失活。這些特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用使得T5核酸外切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,尤其是在DNA克隆和基因片段組裝中,具有重要的應(yīng)用價值。Recombinant Human ENPP-2/Autotaxin Protein,His TagFnCas12a在完成特異性切割后,還能非特異性地切割其他單鏈DNA,這一特性被用于開發(fā)了多種核酸檢測技術(shù)。

Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動化和高通量操作**:磁珠法易于與自動化設(shè)備結(jié)合,適合高通量樣本處理,這對于大規(guī)?;蚩寺№?xiàng)目尤為重要。自動化操作減少了人為操作誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測和基因編輯效率評估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點(diǎn):1.**基因編輯效率評估**:-T7EI用于評估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)上對細(xì)胞群體進(jìn)行基因編輯的效率。-通過PCR擴(kuò)增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)的基因組DNA,如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)事件引入了突變,變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴(kuò)增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**:-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變,則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識別該DNA上的不完全配對的DNA位點(diǎn)然后進(jìn)行雙鏈切割,通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶,從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯配DNA,不能識別1bp的插入、缺失或突變。3.**實(shí)驗(yàn)步驟**:-收集細(xì)胞并提取基因組DNA,然后使用PCR擴(kuò)增期望編輯的基因組區(qū)域。擴(kuò)增子的長度建議為0.5-1kb。-對擴(kuò)增的DNA進(jìn)行變性和退火復(fù)性,以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物,在37℃孵育15分鐘。

隨后,泛素分子從E1轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2,再通過泛素連接酶E3的作用,將泛素分子連接到靶蛋白上。

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BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有以下影響:1.**防止交叉污染**:BstDNA聚合酶具有較高的dUTP耐受性,這意味著它可以在反應(yīng)體系中添加dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)的情況下工作,有效防止LAMP產(chǎn)物的交叉污染,確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。2.**保持靈敏度和擴(kuò)增效率**:即使在引入dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng),使用dUTP替換dTTP的情況下,BstDNA聚合酶的靈敏度及擴(kuò)增效率不受影響。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,在反應(yīng)體系中添加dUTP對BstDNA聚合酶的擴(kuò)增靈敏度和效率沒有負(fù)面影響。3.**提高實(shí)驗(yàn)的可靠性**:由于BstDNA聚合酶能夠在高濃度的dUTP存在下保持活性,這使得它在進(jìn)行等溫擴(kuò)增時更加可靠,尤其是在需要防止DNA污染的實(shí)驗(yàn)中。4.**兼容dUTP/UDG系統(tǒng)**:BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性好,高度兼容dUTP/UDG系統(tǒng),這對于避免交叉污染和提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。綜上所述,BstDNA聚合酶的高dUTP耐受性為等溫擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)提供了一個重要的優(yōu)勢,即在保持高靈敏度和擴(kuò)增效率的同時,能夠有效防止交叉污染,從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。UDG在結(jié)構(gòu)上屬于單功能DNA糖基化酶,它通過沿著DNA鏈滑動,識別尿嘧啶分子,進(jìn)行堿基切除。Recombinant PE-Labeled Human CD7 Protein,His-Avi Tag

研究表明,優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細(xì)胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率。Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein,His Tag

Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR產(chǎn)物的克隆中主要應(yīng)用在以下幾個方面:1.**單鏈DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸,底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,因此可以用來消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,從而生成單鏈DNA,這對于某些克隆技術(shù)來說是必要的步驟。2.**PCR產(chǎn)物的克隆**:-在克隆過程中,有時需要將PCR產(chǎn)物的5'端磷酸化,以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,從而在一定程度上幫助準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物。3.**減少自身環(huán)化和非特異性連接**:-在連接反應(yīng)中,為了減少質(zhì)粒載體的自身環(huán)化,可以使用堿性磷酸酶處理質(zhì)粒DNA以去除5'磷酸基團(tuán)。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情況下,它可以輔助減少PCR產(chǎn)物的自身環(huán)化,尤其是在PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)中。4.**提高克隆效率**:-通過消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產(chǎn)物的非特異性連接,從而提高克隆的效率和準(zhǔn)確性。綜上所述,Lambda核酸外切酶在PCR產(chǎn)物的克隆中主要通過生成單鏈DNA、準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物、減少自身環(huán)化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發(fā)揮作用。Recombinant Cynomolgus CD36/SR-B3 Protein,His Tag