Recombinant Mouse FOLR1 Protein

來源: 發(fā)布時間:2024-10-10

PNGaseF(肽-N-糖苷酶F)是一種普遍使用的酶,它可以從N-連接糖蛋白中去除幾乎所有類型的N-連接糖鏈。其活性和穩(wěn)定性可能會在不同的pH條件下發(fā)生變化。根據(jù)NEB(NewEnglandBiolabs)提供的PNGaseF產(chǎn)品信息,PNGaseF的好的活性和穩(wěn)定性pH為7.5。在pH7.5時,PNGaseF的活性可以達(dá)到100%。然而,酶在不同溫度下的活性表現(xiàn)也有所不同:在37°C時活性為100%,在30°C時也保持100%,而在23°C時活性下降到65%,17°C時為40%,在3°C時幾乎無活性。這表明PNGaseF的活性隨溫度降低而下降,盡管pH值對酶活性有重要影響,但溫度也同樣是一個重要因素。此外,PNGaseF的活性會受到SDS的抑制,因此在變性條件下進(jìn)行酶切時,反應(yīng)混合物中必須包含NP-40,以1:1的比例存在,以抵消SDS的抑制作用。對于非變性條件下的酶切,可能需要更多的酶和更長的孵育時間。在實驗操作中,為了確保PNGaseF的好的活性,建議按照制造商提供的推薦緩沖液和條件進(jìn)行實驗。如果需要在不同的pH條件下使用PNGaseF,可能需要通過實驗優(yōu)化來確定好的條件。

蛋白在表達(dá)過程中形成包涵體,需要通過復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊。Recombinant Mouse FOLR1 Protein,His Tag

Recombinant Mouse FOLR1 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

11A型肺炎多糖鼠單抗是針對肺炎鏈球菌11A型多糖的單克隆抗體,具有以下特點:1.**特異性**:鼠單抗具有高度的特異性,能夠識別并結(jié)合到11A型肺炎鏈球菌的多糖抗原。2.**制備方法**:通過將肺炎多糖與乙肝表面蛋白的偶聯(lián)物作為抗原免疫小鼠,然后從小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出能夠表達(dá)特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株。3.**應(yīng)用**:11A型肺炎多糖鼠單抗可用于定量檢測33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白,其制備的腹水型單抗對不同批次的樣本回收率為95%~105%。4.**疫苗開發(fā)**:在肺炎鏈球菌疫苗的研發(fā)中,多糖蛋白結(jié)合疫苗是當(dāng)前的趨勢,通過將多糖與蛋白偶聯(lián),可以提供更高效價的抗體水平和免疫記憶。5.**免疫反應(yīng)**:11A型肺炎多糖鼠單抗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對肺炎多糖的血清抗體,這有助于研究肺炎鏈球菌的免疫機(jī)制。6.**疾病預(yù)防**:肺炎鏈球菌是引起肺炎、腦膜炎和敗血癥等嚴(yán)重疾病的主要病原體,11A型肺炎多糖鼠單抗的研究有助于開發(fā)更有效的疫苗,預(yù)防相關(guān)疾病。7.**研究進(jìn)展**:已有研究報道了使用半合成寡糖結(jié)合疫苗候選物,能夠激發(fā)對肺炎鏈球菌3型的保護(hù)性免疫反應(yīng)。

Recombinant Mouse FOLR1 Protein,His TagFnCas12a需要一個crRNA,而不需要tracrRNA,簡化了RNA的設(shè)計和構(gòu)建過程。

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使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割時,為保證高純度和高活性,需要考慮以下關(guān)鍵因素:1.**特異性切割位點**:確保融合蛋白中包含PreScissionProtease特異性識別的序列,以實現(xiàn)精確切割。2.**酶與底物的比例**:適當(dāng)比例的酶量對于高效切割至關(guān)重要,過多或過少的酶都可能影響切割效率和純度。3.**反應(yīng)條件**:包括溫度、pH和反應(yīng)時間等,這些條件需要優(yōu)化以確保酶的活性和選擇性。通常,PreScissionProtease在4°C下進(jìn)行酶切。4.**緩沖液兼容性**:使用與PreScissionProtease兼容的緩沖液,避免使用可能抑制酶活性的離子或化學(xué)物質(zhì)。5.**蛋白濃度**:確保融合蛋白有足夠的濃度,以提高切割效率和減少樣品損失。6.**酶切后的分離**:切割后,需要有效分離目的蛋白和切割下來的標(biāo)簽,通常利用親和層析等方法。7.**避免蛋白降解**:在實驗過程中添加蛋白酶抑制劑,以防止蛋白降解酶對目的蛋白的降解。8.**避免蛋白質(zhì)聚集**:在切割過程中,應(yīng)避免條件導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或沉淀,這可能會影響純度和活性。9.**避免氧化**:在蛋白質(zhì)處理過程中,添加抗氧化劑如DTT或TCEP,以防止半胱氨酸殘基的氧化。10.**清潔的實驗環(huán)境**:確保實驗器材和環(huán)境的清潔,避免微生物污染和核酸污染。

PNGaseF(肽-N-糖苷酶F,Peptide-N-glycosidaseF),也稱為N-糖酰胺酶F,是一種用于糖蛋白研究的酶,它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關(guān)鍵特性和應(yīng)用:1.**作用機(jī)制**:PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈,釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應(yīng)用領(lǐng)域**:PNGaseF在糖生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究中非常重要,用于分析糖蛋白的糖基化模式和結(jié)構(gòu)。3.**酶的來源**:PNGaseF開始是從大腸桿菌(Escherichiacoli)中分離出來的,現(xiàn)在也可以通過重組DNA技術(shù)在其他宿主細(xì)胞中表達(dá)。4.**酶的純度和活性**:商業(yè)化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性,確保了在實驗中的高效性和可重復(fù)性。5.**使用條件**:PNGaseF在溫和的條件下工作,通常在pH7.5至9.0之間,溫度在37°C左右。6.**穩(wěn)定性**:PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存,以保持其活性。在適當(dāng)?shù)臈l件下,該酶可以保持穩(wěn)定和活躍。7.**樣品準(zhǔn)備**:在使用PNGaseF之前,糖蛋白樣品需要適當(dāng)準(zhǔn)備,可能包括純化和緩沖液交換,以確保反應(yīng)條件的一致性。UDG在結(jié)構(gòu)上屬于單功能DNA糖基化酶,它通過沿著DNA鏈滑動,識別尿嘧啶分子,進(jìn)行堿基切除。

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EndoS糖苷內(nèi)切酶在ADCs制備中的具體應(yīng)用步驟,根據(jù)上海藥物研究所的研究,可以概括為以下幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié):1.**篩選糖底物和糖苷內(nèi)切酶**:研究人員篩選了一系列糖底物和糖苷內(nèi)切酶,發(fā)現(xiàn)Endo-S2酶能夠?qū)⒍堑孜風(fēng)acNAc轉(zhuǎn)移至去糖抗體N297位糖基化位點,且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響Endo-S2的轉(zhuǎn)糖基化活性。2.**抗體糖基化改造**:利用Endo-S2和LacNAc的組合,直接實現(xiàn)野生型抗體的糖基化改造。Endo-S2對多樣化LacNAc修飾的兼容性,可以高效獲得功能修飾的糖工程抗體。3.**設(shè)計合成藥物-連接子復(fù)合物**:研究人員設(shè)計并合成了LacNAc-linker-drug復(fù)合物結(jié)構(gòu),這是實現(xiàn)定點ADC化合物“一步”組裝的關(guān)鍵。4.**“一步”定點偶聯(lián)**:通過Endo-S2的催化作用,將小分子細(xì)胞毒藥物通過特定的糖鏈結(jié)構(gòu)直接定點連接到抗體的糖基化位點,簡化了ADCs的制備流程。5.**評價和測試**:對獲得的糖鏈定點ADC化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)均一性、親水性、體外穩(wěn)定性及體外活性的測試。測試結(jié)果顯示,這些化合物具有非常好的結(jié)構(gòu)均一性(DAR=2)、親水性和體外穩(wěn)定性,并且在體外具有強(qiáng)大的抑制活性。

His-Avi Tag包含了特定肽段,分子量預(yù)測為50.20 kDa,但由于糖基化,其在Tris-Bis PAGE結(jié)果上遷移至55-60 kDa。T4多聚核苷酸激酶

在50 μL的反應(yīng)體系中,建議使用1.5 μL的5× PCR Enhancer(如果需要)和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。Recombinant Mouse FOLR1 Protein,His Tag

酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(PNGaseF)在實際應(yīng)用中具有以下優(yōu)勢:1.**高比活性**:具有高達(dá)750,000U/mL的比活性,這表明該酶在催化反應(yīng)中具有很高的效率。2.**快速反應(yīng)**:新型的FastPNGaseF能在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性的去糖基化,縮短了實驗時間。3.適用性:PNGaseF可以用于天然或變性條件下的糖蛋白或糖多肽的去N-糖基化修飾。4.**無其他糖苷酶活性**:該酶專一性高,無其他糖苷酶活性,確保了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。5.**His標(biāo)簽**:帶有His標(biāo)簽,便于通過親和層析進(jìn)行純化和檢測。6.**穩(wěn)定性和儲存條件**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,-15~-25℃保存,有效期長達(dá)1年。7.**簡化的實驗流程**:FastPNGaseF簡化了實驗流程,減少了實驗時間,同時保持了靈敏度和重復(fù)性。8.**兼容性好**:去糖基化后的產(chǎn)物可以直接用于下游的色譜或質(zhì)譜分析,無需額外的純化步驟。9.**無偏好性**:能夠迅速且無偏好性地去除所有的N-糖鏈,確保了獲得的糖鏈分布能夠表示抗體的正確組成。Recombinant Mouse FOLR1 Protein,His Tag