Recombinant Mouse PSCAProtein

來源: 發(fā)布時間:2024-09-25

重組增強型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點和應(yīng)用:1.**高熒光強度**:EGFP比野生型GFP具有更強的熒光,這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報告基因用于基因表達分析,也可以作為融合標簽用于蛋白質(zhì)定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長時間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個氨基酸構(gòu)成。牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I具有解超螺旋的活性,可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),便于后續(xù)的酶切反應(yīng)。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag

Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag,標準物質(zhì)

通過SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)和Westernblot(西方印跡)可以有效地檢測帶有His標簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進行這些檢測的步驟:###SDS-PAGE步驟:1.**樣品準備**:-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,通常含有還原劑(如DTT或β-巰基乙醇)以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準備**:-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度(例如,12%或15%凝膠用于檢測20-100kDa的蛋白質(zhì))。3.**上樣**:-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中,同時加入分子量標記物作為參照。4.**電泳**:-在恒定電壓或恒定電流下進行電泳,直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**:-使用考馬斯亮藍或其他蛋白質(zhì)染色劑對凝膠進行染色,以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**:-通過比較樣品條帶與分子量標記物,評估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟:1.**轉(zhuǎn)膜**:-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**:-使用封閉液(如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液)封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分,以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**:-使用特異性識別His標簽的抗體(一抗)與膜上的蛋白質(zhì)孵育,通常在4°C過夜。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I是一種來源于牛痘病毒的酶,有多種作用于DNA分子的能力。

Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag,標準物質(zhì)

EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點:1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物,實現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時。

酵母重組表達的PNGaseF(N-糖苷酶F)是一種用于蛋白質(zhì)去糖基化實驗的酰胺水解酶,具有以下特點以確保實驗中的活性和穩(wěn)定性:1.**高效性**:具有高比活性,例如750000U/mL,這有助于快速高效地進行去糖基化反應(yīng)。2.**穩(wěn)定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,比較好的活性和穩(wěn)定性可維持長達24個月。3.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**:建議在-15~-25℃保存,有效期1年。5.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**:提供了使用說明,包括變性和非變性條件下的蛋白質(zhì)去糖基化步驟。7.**His標簽**:產(chǎn)品帶有His標簽,便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應(yīng)**:有些產(chǎn)品如FastPNGaseF,可以在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**:產(chǎn)品供科研使用,操作時應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)膶嶒炇曳雷o裝備。遵循這些指導(dǎo)原則和產(chǎn)品說明,可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩(wěn)定性,從而獲得可靠的去糖基化結(jié)果。去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈,使泛素分子得以回收和再利用。

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在ADCs(抗體藥物偶聯(lián)物)的制備過程中,確保藥物的穩(wěn)定性和生物活性是至關(guān)重要的。以下是幾個關(guān)鍵步驟和技術(shù)要點:1.**藥物抗體比(DAR)的控制**:DAR是影響ADC穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素。通過控制DAR和藥物負荷分布,可以促進ADC的穩(wěn)定性。DAR值在2-4之間通常被認為是好的選擇,但后面的DAR值需要通過穩(wěn)定性試驗、體內(nèi)有效性和藥代動力學(xué)共同決定。2.**連接子的選擇**:連接子在化學(xué)過程中、血漿循環(huán)以及產(chǎn)品儲存過程中的穩(wěn)定性非常關(guān)鍵。連接子的選擇決定了抗體藥物的DAR,并且連接子的穩(wěn)定性影響著ADC的整體穩(wěn)定性。3.**有效載荷的選擇**:有效載荷對ADC的毒性和生物活性至關(guān)重要。選擇具有高度細胞毒性且能在靶細胞內(nèi)有效釋放的有效載荷是必要的。同時,有效載荷及其代謝形式?jīng)Q定了ADC分子的毒性。4.**制劑配方的優(yōu)化**:ADC的制劑配方需要考慮抗體、連接子和有效載荷的穩(wěn)定性和特性。pH值、緩沖液、離子強度、表面活性劑和抗氧化劑等都可能影響ADC的穩(wěn)定性。5.**避免聚集**:ADC的聚集傾向比單獨的抗體更高,因此需要采取措施減少聚集,如使用非離子表面活性劑和優(yōu)化凍干工藝。

Pfu DNA Polymerase 適合擴增較長的DNA片段,有助于在基因編輯中處理大的基因區(qū)域或復(fù)雜的基因結(jié)構(gòu)。Recombinant Mouse Leptin Protein,hFc Tag

在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點的突變,或在基因組中插入特定的DNA序列。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag

EndoS糖苷內(nèi)切酶S在抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)研究中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在糖鏈定點偶聯(lián)技術(shù)上。通過上海藥物所的研究,開發(fā)了一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略,利用EndoS2這種糖苷內(nèi)切酶,可以將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體的糖基化位點,實現(xiàn)了糖鏈定點ADC化合物的制備。定點偶聯(lián)技術(shù)相比傳統(tǒng)的隨機偶聯(lián)具有更好的方法指數(shù),能夠提高ADC的均一性和穩(wěn)定性,是當(dāng)前ADC領(lǐng)域的研究熱點之一。在抗體的Fc結(jié)構(gòu)域N297位,這是一個保守的糖基化位點,通過在該位點引入細胞物質(zhì),可以形成具有優(yōu)勢的糖鏈定點ADC化合物(glycosite-specificADCs,gsADCs)。此外,EndoS2對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體,并且可以用于抗體的內(nèi)吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點ADC化合物,在結(jié)構(gòu)均一性、親水性、體外穩(wěn)定性以及體外活性方面表現(xiàn)良好,并且在體內(nèi)瘤抑制活性方面,相比陽性對照ADC化合物,在低載藥量的情況下具有更強的抑制效果。EndoS酶的這些應(yīng)用,不僅展示了其在簡化ADC制備流程中的潛力,還有助于推動定點ADC藥物的深入發(fā)展,為未來的生物藥物開發(fā)提供了新的思路和方法。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag