Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein

來源: 發(fā)布時間:2024-09-24

酵母重組表達的N-糖苷酶F(PNGaseF)是一種酰胺水解酶,具有以下特點:1.**高效性**:PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法。它能夠在幾分鐘內(nèi)快速且無偏倚地釋放所有的N-糖鏈,適合后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析。2.**重組酶**:該酶是重組的酰胺酶,能夠從高甘露糖、雜合和復雜寡糖中切割內(nèi)GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接。3.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。4.**儲存穩(wěn)定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,好的活性和穩(wěn)定性可維持長達24個月。5.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。6.**比活性**:具有高達100000U/mL的比活性。7.**His標簽**:產(chǎn)品帶有His標簽,常用于抗體及其相關蛋白的完全去糖基化。8.儲存條件:-25~-15℃保存,有效期1年。9.**無甘油版本**:還提供了無甘油版本的PNGaseF,這有助于在HPLC和質(zhì)譜分析中獲得結(jié)果。10.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。這些特點使得酵母重組表達的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的重要工具。Phusion DNA Polymerase 應在后面加入反應體系中,以避免其3'-5'外切酶活性降解引物。Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein

Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein,標準物質(zhì)

酵母重組表達的PNGaseF(N-糖苷酶F)是一種用于蛋白質(zhì)去糖基化實驗的酰胺水解酶,具有以下特點以確保實驗中的活性和穩(wěn)定性:1.**高效性**:具有高比活性,例如750000U/mL,這有助于快速高效地進行去糖基化反應。2.**穩(wěn)定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,比較好的活性和穩(wěn)定性可維持長達24個月。3.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**:建議在-15~-25℃保存,有效期1年。5.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**:提供了使用說明,包括變性和非變性條件下的蛋白質(zhì)去糖基化步驟。7.**His標簽**:產(chǎn)品帶有His標簽,便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應**:有些產(chǎn)品如FastPNGaseF,可以在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**:產(chǎn)品供科研使用,操作時應穿戴適當?shù)膶嶒炇曳雷o裝備。遵循這些指導原則和產(chǎn)品說明,可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩(wěn)定性,從而獲得可靠的去糖基化結(jié)果。Recombinant Human Aggrecan Protein,His Tag激發(fā)的泛素被轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。

Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein,標準物質(zhì)

SpCas9蛋白(來自化膿性鏈球菌的Cas9蛋白)在基因編輯中的主要作用是作為核酸酶,能夠精確地切割目標DNA序列。以下是SpCas9在基因編輯中的幾個關鍵步驟和作用:1.**識別和結(jié)合**:SpCas9蛋白與一個單導向RNA(sgRNA)結(jié)合,形成RNP復合物。這個復合物能夠識別并結(jié)合到基因組中與sgRNA互補的特定DNA序列。2.**PAM序列識別**:SpCas9需要一個稱為原間隔子相鄰基序(PAM)的特定序列作為識別目標DNA的先決條件。對于SpCas9,這個PAM序列通常是5'-NGG-3'。3.**DNA切割**:一旦RNP復合物與目標DNA結(jié)合,SpCas9就會在PAM序列的3個堿基對的上游位置切割DNA雙鏈,產(chǎn)生一個雙鏈斷裂(DSB)。4.**引發(fā)DNA修復**:DNA雙鏈斷裂觸發(fā)細胞的DNA修復機制,包括同源定向修復(HDR)和非同源末端連接(NHEJ)。研究人員可以利用這些修復機制來插入、刪除或替換特定的DNA序列。5.**基因修改**:通過HDR,可以在斷裂的DNA兩端引入特定的DNA模板,從而實現(xiàn)精確的基因編輯。而NHEJ通常會導致小的插入或缺失(indel),這可以用來產(chǎn)生基因的敲除或敲入。6.**提高編輯效率**:為了提高SpCas9的編輯效率,研究人員可能會使用優(yōu)化的sgRNA設計、蛋白質(zhì)工程或嵌合融合蛋白等策略。

通過SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)和Westernblot(西方印跡)可以有效地檢測帶有His標簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進行這些檢測的步驟:###SDS-PAGE步驟:1.**樣品準備**:-將重組泛素蛋白溶解在適當?shù)木彌_液中,通常含有還原劑(如DTT或β-巰基乙醇)以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準備**:-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度(例如,12%或15%凝膠用于檢測20-100kDa的蛋白質(zhì))。3.**上樣**:-將變性后的樣品加入到凝膠的相應孔中,同時加入分子量標記物作為參照。4.**電泳**:-在恒定電壓或恒定電流下進行電泳,直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**:-使用考馬斯亮藍或其他蛋白質(zhì)染色劑對凝膠進行染色,以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**:-通過比較樣品條帶與分子量標記物,評估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟:1.**轉(zhuǎn)膜**:-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**:-使用封閉液(如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液)封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分,以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**:-使用特異性識別His標簽的抗體(一抗)與膜上的蛋白質(zhì)孵育,通常在4°C過夜。Probe qPCR Mix (2×)通常含有熱啟動DNA聚合酶,這種聚合酶在高溫下激發(fā),可以減少非特異性擴增 。

Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein,標準物質(zhì)

NLS-Cas9-EGFPNuclease在基因編輯中提高特異性的策略包括:1.**核定位信號(NLS)**:NLS有助于Cas9蛋白快速定位到細胞核,這可以減少Cas9在細胞質(zhì)中的非特異性結(jié)合,從而降低脫靶效應。2.**瞬時表達**:由于NLS-Cas9-EGFPNuclease是作為蛋白質(zhì)直接遞送的,它在細胞內(nèi)不會經(jīng)歷長時間的表達,這限制了Cas9的活性時間窗口,減少了長時間存在導致的脫靶風險。3.**優(yōu)化gRNA設計**:精心設計的gRNA可以提高特異性,通過選擇與目標基因特異性匹配的gRNA,可以減少Cas9在非目標位點的切割。4.**使用高保真Cas9變體**:一些Cas9變體被設計為具有更高的特異性,通過突變Cas9蛋白的某些氨基酸,可以降低其在非目標位點的活性。5.**熒光標記(EGFP)**:EGFP標簽不僅用于追蹤和分選,還可以幫助研究者通過熒光激起細胞分選(FACS)富集成功編輯的細胞,從而提高編輯特異性。6.**體外驗證**:在實際進行體內(nèi)基因編輯之前,可以通過體外DNA切割實驗驗證gRNA的特異性和效率,篩選出比較好的gRNA。7.**使用PAM序列優(yōu)化**:通過選擇具有限制性PAM序列的gRNA,可以減少可能的脫靶位點。

許多Probe qPCR Mix (2×)產(chǎn)品采用熱啟動DNA聚合酶,能減少非特異性擴增,提高反應的靈敏度和特異性 。Recombinant Human Siglec-3/CD33 Protein,His-Avi Tag

Taq DNA Polymerase 能夠在相對較高的溫度下保持穩(wěn)定,其適催化溫度在75-80°C。Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein

為確保大腸桿菌表達的重組抑肽酶的純度和活性,需要考慮以下幾個關鍵步驟:1.**高質(zhì)量的細胞培養(yǎng)**:在GMP法規(guī)下生產(chǎn),確保無動物源成分,從而避免動物源性的病毒污染。2.**蛋白純化技術**:通過多次柱純化過程來獲得高純度的重組抑肽酶,通常純度達到≥95%(HPLC)。3.**活性測定**:使用標準化的生物活性測定方法來確保每毫克蛋白質(zhì)的活性單位(EPU),通?!?.0EPU/mgpro。4.**質(zhì)量控制**:通過高效液相色譜(HPLC)等技術進行質(zhì)量控制,確保蛋白含量和純度符合標準。5.**穩(wěn)定性和儲存條件**:凍干粉在2~8℃條件下保存,有效期為2年,確保了長期穩(wěn)定性。6.**使用建議**:提供明確的使用方法,包括推薦的結(jié)合pH值和溶解介質(zhì),例如使用0.9%NaCl溶解,并建議在pH<3.0條件下不結(jié)合,以保證活性。7.**法規(guī)符合性**:生產(chǎn)設備和環(huán)境符合相關法規(guī)要求,遵循NSFISO9001:2015質(zhì)量體系,并符合GMP指導原則,確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性。通過這些步驟,可以確保重組抑肽酶的純度和活性,從而在科研和生物技術應用中發(fā)揮其作用。Recombinant Human Oncostatin-M/OSM Protein