上海常見臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    培養(yǎng)基化學(xué)分類編輯語音培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低，除在實驗室經(jīng)常使用外，也適于用來進行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基組合培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計而配制的培養(yǎng)基。例如，高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方，配制合成培養(yǎng)基時重復(fù)性強，但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高，微生物在其中生長速度較慢，一般適于在實驗室用來進行有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制，同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如，馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基物理分類編輯語音培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。上海常見臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至，若pH值超過，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時期細菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)***素，一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均被***為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。長寧區(qū)推廣臨床微生物檢驗培養(yǎng)基建筑取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。

    然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成（兩種情況各置3瓶）。觀察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果，統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率。***分化及植株再生培養(yǎng)將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照，溫度20-22℃條件下培養(yǎng)3周，統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況***愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后，愈傷組織基本形成，即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示。6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成，且都未發(fā)生污染，但誘導(dǎo)率幾乎各不相同。其中，在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為，在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為。由于實驗過程中，外植體即***葉片取得偏小，接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡，使整個實驗的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小。動物細胞培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基是一個全營養(yǎng)型培養(yǎng)基，***應(yīng)用于哺乳動物細胞和雜交瘤細胞的培養(yǎng)，如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞。**初設(shè)計用于懸浮細胞培養(yǎng)和人白血病細胞的單層細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基編輯語音選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。

    蒸餾水）919mlSE培養(yǎng)基·6H2OFe—EDTA1mlA5solution1000×1mldistilledwater958mlSoilExtract（土壤提取液）配置方法取花園土未施過肥，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時，冷卻數(shù)小時，在無菌條件下過濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃?zhèn)溆?。CompositionoftheA5solutionAddto100mlofdistilledwater:（加入100ml的蒸餾水）（NH4）：將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl（），混勻即可。Na2EDTA1gdistilledwater50mlFeCl3·6H2O81mgHCl（）50mlPr培養(yǎng)基Preparation:to997mLofglass-distilledwater,addgproteosepeptone,gagar,andthefollowingstocksolutions:workingsolutiong/()1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。***培養(yǎng)基薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類***所常用的。馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時后，補足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對象，二是取材過程。

    如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期，體外培養(yǎng)細胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。***使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因：來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時間的應(yīng)用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量**大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)**高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。上海常見臨床微生物檢驗培養(yǎng)基地方

用于取材的動物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi)。上海常見臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1．提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。2．提供***和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)***（氫化可的松、**）、類固醇***（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3．提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。4．提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。5．對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被***用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。上海常見臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

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