原代肝細胞的體外培養(yǎng)一直是困擾學者們開展肝病研究的難題。為了研究肝臟的生理和病理過程，學者們一直在努力開發(fā)體外培養(yǎng)原代肝細胞的方法。 一般來說，原代肝細胞體外培養(yǎng)可以維持7-14天左右，7天以后細胞的狀態(tài)和活率會逐漸開始下降。 為了克服這些局限性，科學家們開始嘗試將肝實質(zhì)細胞和肝非實質(zhì)細胞共同培養(yǎng)。根據(jù)鄧宏魁教授的5C文章，將肝實質(zhì)細胞和肝非實質(zhì)細胞共同培養(yǎng)時，肝實質(zhì)細胞和肝非實質(zhì)細胞可以相互作用，形成更加復雜的細胞群體，從而更好地模擬肝臟的生理和病理過程，通過這種方法可以將原代肝細胞體外培養(yǎng)128天。 當然，共同培養(yǎng)方法也存在一些局限性，比如如何控制細胞的生長和分化、如何保持細胞的穩(wěn)定性等。但是，隨著技術的不斷進步，相信這種方法將會越來越成熟，為研究肝臟生理和病理提供更加有效的手段。原代肝細胞能模擬肝臟對藥物的代謝和毒性反應，是藥物的安全性評價和藥代動力學研究的重要的實驗模型。東莞草魚原代肝細胞分離
細胞外基質(zhì)（ECM）成分可以讓原代肝細胞在培養(yǎng)皿中貼壁效果更好。例如膠原蛋白、基質(zhì)膠或人纖維鏈接蛋白，這些成分可以模擬細胞在人體內(nèi)所處的微環(huán)境，從而提升細胞的狀態(tài)和生長能力。 膠原蛋白是一種重要的細胞外基質(zhì)成分，它可以提供細胞所需的支撐和結構。在原代肝細胞培養(yǎng)中，加入膠原蛋白可以讓原代肝細胞更好地附著在培養(yǎng)皿上，從而促進原代肝細胞的生長和分化。 基質(zhì)膠是一種含有多種細胞外基質(zhì)成分的復合物，它可以提供更加復雜和多樣化的細胞外環(huán)境。在原代肝細胞培養(yǎng)中，加入基質(zhì)膠可以模擬細胞在人體內(nèi)所處的復雜環(huán)境，從而提高細胞的適應性和生長能力。此外，基質(zhì)膠還可以促進細胞間的相互作用和信號傳遞，從而增強原代肝細胞的功能和穩(wěn)定性。 人纖維鏈接蛋白是一種重組的細胞外基質(zhì)成分，它可以提供細胞所需的支撐和結構。 加入細胞外基質(zhì)成分可以可以模擬細胞在人體內(nèi)所處的微環(huán)境，讓原代肝細胞在培養(yǎng)皿中更好地生長和分化，從而提高細胞的狀態(tài)和穩(wěn)定性。浙江中國人原代肝細胞分離培養(yǎng)立沃生物原代肝細胞配套有專業(yè)的技術團隊，對后續(xù)的細胞復蘇，培養(yǎng)，實驗開展提供有力的技術保障。
原代肝細胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團，胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長，生存空間大，允許長時間生長，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細胞相互接觸后可抑制細胞的運動，因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當細胞數(shù)量達到一定密度后，由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細胞分裂停止，稱為密度抑制。 當肝細胞被分離后，可以進行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在開始的4~6h內(nèi)細胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時間的延長而迅速下降，故懸浮肝細胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復過來，保持了正常肝細胞的生物學特征及代謝活性，一般用于酶誘導研究、藥物細胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。
原代肝細胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細胞在體外的培養(yǎng)時間較短，人原代肝細胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細胞凋亡情況。北京大學鄧宏魁教授發(fā)表在《科學》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細胞去分化進程，可在體外長期維持肝細胞的分化狀態(tài)，維持時間長達八周。那為什么原代肝細胞在體外容易去分化呢？肝細胞在體外缺乏了肝細胞與肝非實質(zhì)細胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結構?；谝陨蠁栴}與分析，我在碩士期間開展了肝細胞與肝非實質(zhì)細胞的共培養(yǎng)工作。結果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細胞可在體外長期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細胞間交流是原代肝細胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細胞體外維持四個月的時間記錄仍然沒有被打破。 立沃生物的原代肝細胞提供多種細胞培養(yǎng)技術培訓服務，包括細胞培養(yǎng)技術培訓、細胞培養(yǎng)實驗指導等。
原代肝細胞的來源供體來源很多。鑒于人原代肝細胞存在數(shù)量稀缺和倫理道德等問題,研究人員嘗試從動物肝臟中分離原代肝細胞,用來體外培養(yǎng)并進行研究。使用較多的是嚙齒動物,還有一些哺乳動物和魚類。目前常用的供體品系有樹鼩、大小鼠、豬、新西蘭兔、比格犬、貓、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚等。 原代肝細胞除了供體品系不同以外，也會根據(jù)細胞來源的供體數(shù)，分為單供體和多供體。供體數(shù)的選擇主要取決于實驗的研究目的。 原代肝細胞的應用場景也很多。隨著技術水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動物和人肝細胞已廣泛應用于藥物研究：①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學的研究；②預測和解釋藥物與藥物之間的相互作用；③研究藥物的細胞毒性等。懸浮肝細胞主要應用于藥物代謝研究，一般使用多供體混合懸浮肝細胞，適用于試驗周期比較短的實驗。廣州豬原代肝細胞購買
立沃生物的原代肝細胞可提供不同狀態(tài)的細胞，如貼壁細胞、懸浮細胞等，滿足客戶各種使用場景的個性化需求。東莞草魚原代肝細胞分離
在新藥研發(fā)的過程中，原代肝細胞是不可或缺的體外模型，這是因為肝臟能夠代謝大部分藥物。因此，通過使用原代肝細胞，可以更加準確地模擬藥物在人體內(nèi)的代謝和毒理反應，為新藥研發(fā)提供更加可靠的數(shù)據(jù)支持。 在藥物代謝實驗中，原代肝細胞可以幫助研究人員了解藥物在體內(nèi)的代謝途徑、代謝產(chǎn)物以及代謝速率等信息。這些信息對于藥物的研發(fā)和臨床應用都具有重要意義。同時，在藥物毒理實驗中，原代肝細胞也能夠幫助研究人員評估藥物的毒性和安全性，為藥物的臨床應用提供保障。 除此之外，原代肝細胞還可以用于藥物靶向誘導實驗。通過對原代肝細胞進行特定的處理，可以使其表達特定的蛋白質(zhì)或基因，從而實現(xiàn)對藥物靶向的調(diào)控。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物的作用機制，為藥物的研發(fā)和應用提供更加可靠的指導。 原代肝細胞在新藥研發(fā)中具有不可替代的重要作用。利用原代肝細胞，可以更加準確地模擬藥物在人體內(nèi)的代謝和毒理反應，為藥物的研發(fā)和臨床應用提供更加可靠的數(shù)據(jù)支持。東莞草魚原代肝細胞分離