東莞樹鼩原代肝細胞培養(yǎng)技巧

來源: 發(fā)布時間:2024-04-22

原代肝細胞也可以用于Organ-on-a-chip的構建。Organ-on-a-chip是一項創(chuàng)新性的科技成果,它在載玻片大小的芯片上構建了一個完整的生理組織微系統(tǒng),其中包含有原代肝細胞、肝非實質細胞、生物流體和機械力所需微環(huán)境的關鍵要素。這個微型肝臟模型可以在體外模擬人體肝臟的主要結構功能特征和復雜的組織間聯(lián)系,為藥物藥效評價、藥物安全性評價、化妝品安全性評價、食品安全性評價、環(huán)境保護評價等提供了一種全新的方法和手段。 這個微型肝臟模型的研發(fā),是在對傳統(tǒng)的肝臟模型進行改進和創(chuàng)新的基礎上實現(xiàn)的。傳統(tǒng)的肝臟模型通常是基于動物實驗或體外細胞培養(yǎng)的方法,但這些方法存在著很多的局限性和缺陷。例如,動物實驗不僅存在著倫理和道德問題,而且還存在著種屬差異、生理反應差異等問題;而體外細胞培養(yǎng)則存在著細胞失活、細胞分化等問題。因此,Organ-on-a-chip的出現(xiàn),填補了這些傳統(tǒng)方法的空白,為科學研究和工業(yè)應用提供了更加可靠和有效的手段。立沃生物原代肝細胞配套提供多種細胞培養(yǎng)實驗定制服務,包括細胞培養(yǎng)實驗設計、細胞培養(yǎng)實驗方案設計等。東莞樹鼩原代肝細胞培養(yǎng)技巧

原代肝細胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細胞培養(yǎng)是一種常用的實驗方法,但在培養(yǎng)過程中,細胞可能會受到endotoxin的污染,這會影響實驗結果的準確性。 endotoxin是一種由細菌產(chǎn)生的有毒物質,可以引起炎癥反應和細胞損傷。在原代肝細胞培養(yǎng)中,endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)器具或細胞本身。因此,需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑,例如聚陽離子樹脂(Polyclonal Cationic Resin,PCR)或聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol,PVA)。這些去除劑可以吸附endotoxin,從而減少其對細胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單,只需要將其加入培養(yǎng)基中,然后將細胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結果顯示endotoxin含量較高,可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外,還可以采取一些預防措施來減少endotoxin的污染。例如,使用無菌技術操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染,保證實驗結果的準確性。佛山鴨原代肝細胞培養(yǎng)基提高原代肝細胞的活率需要綜合考慮多個因素:細胞培養(yǎng)條件、細胞來源、細胞分離方法、培養(yǎng)基成分等。

細胞密度差異會影響原代肝細胞的形態(tài)。通常情況下,肝細胞在高密度狀態(tài)下會呈現(xiàn)出多邊形的形狀,但是在低密度狀態(tài)下,它們的形態(tài)就會變得多樣化。有些肝細胞會呈現(xiàn)出梭形的形狀,有些則會呈現(xiàn)出五花八門的形態(tài),甚至可能會出現(xiàn)其他奇怪的形狀。這是因為在低密度狀態(tài)下,肝細胞之間的距離較遠,它們之間的相互作用力也會減弱,從而導致它們的形態(tài)發(fā)生變化。這種變化不只是形態(tài)上的變化,還可能會影響到肝細胞的功能和代謝活性。因此,在進行肝細胞培養(yǎng)時,密度的控制是非常重要的,需要根據(jù)實驗的需要進行調整,以保證肝細胞的正常生長和發(fā)育。

原代肝細胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中,根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性,可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團,胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長,生存空間大,允許長時間生長,便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性,細胞相互接觸后可抑制細胞的運動,因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后,雖發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,仍可增殖分裂,但當細胞數(shù)量達到一定密度后,由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,細胞分裂停止,稱為密度抑制。 當肝細胞被分離后,可以進行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在開始的4~6h內(nèi)細胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致,隨時間的延長而迅速下降,故懸浮肝細胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復過來,保持了正常肝細胞的生物學特征及代謝活性,一般用于酶誘導研究、藥物細胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。立沃生物的原代肝細胞的分離技術門檻很高,需要特定的實驗室條件和技術,以及嚴格的實驗室管理和質量控制。

原代肝細胞是藥物早期研究的金標準細胞模型。藥物通過肝臟代謝后,大多數(shù)藥物的毒性被消除,但同時也有一些無毒或低毒的物質通過生物轉化后轉變成有毒甚至毒性更大的物質,因此肝臟便必然成為研究藥物毒性的重要target organ。原代肝細胞即為一個較好的篩選模型,尤其是在檢測結構相關化合物時,原代肝細胞的角色更為重要。 人原代肝細胞是重要的體外模型。人原代肝細胞在較大程度上保留了細胞在體內(nèi)organ里的功能,各種物質代謝功能和酶活性與體內(nèi)的肝細胞極其相似,是較為接近臨床的一種標準體外短期培養(yǎng)模型。人原代肝細胞通常從肝或肝組織中獲得,一般在肝切除手術中或者肝移植后排斥的肝組織中獲取,隨后即時進行研究或者凍存待用。 原代肝細胞是肝臟疾病的研究以及相應藥物的開發(fā)的重要載體。比如一些對于乙肝病毒的研究需要對肝細胞進行體外培養(yǎng);一些嚴重肝臟疾病的細胞移植研究也要涉及到對原代肝細胞進行大量擴增。因此,原代肝細胞的體外培養(yǎng)和研究是一直以來科學家們關注的熱點。立沃生物的原代肝細胞配套提供多種細胞培養(yǎng)輔助試劑,包括細胞復蘇、鋪板、維持培養(yǎng)基和添加劑等。北京食蟹猴原代肝細胞培養(yǎng)步驟

人原代肝細胞的獲取和保存非常困難,且存在批次差異和有限的增殖能力,因此在實際應用中受到了一定的限制。東莞樹鼩原代肝細胞培養(yǎng)技巧

    原代肝細胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上,原代肝細胞可貼壁培養(yǎng),同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細胞在體外的培養(yǎng)時間較短,人原代肝細胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性,培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細胞凋亡情況。北京大學鄧宏魁教授發(fā)表在《科學》上的數(shù)據(jù)顯示,通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細胞去分化進程,可在體外長期維持肝細胞的分化狀態(tài),維持時間長達八周。那為什么原代肝細胞在體外容易去分化呢?肝細胞在體外缺乏了肝細胞與肝非實質細胞的交流,又或者缺乏了肝臟的三維結構?;谝陨蠁栴}與分析,我在碩士期間開展了肝細胞與肝非實質細胞的共培養(yǎng)工作。結果顯示,通過共培養(yǎng),原代肝細胞可在體外長期培養(yǎng),并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性,說明缺乏細胞間交流是原代肝細胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止,原代肝細胞體外維持四個月的時間記錄仍然沒有被打破。 東莞樹鼩原代肝細胞培養(yǎng)技巧