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貓作為原代肝細胞的常用供體,近年來在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究中扮演著越來越重要的角色。相對于小鼠和大鼠等試驗用動物,貓的體型更大,便于試驗操作和觀察,因此被廣泛應(yīng)用于科研、教育和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。據(jù)美國農(nóng)業(yè)部動植物衛(wèi)生檢疫局(APHIS)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,在2017年,美國就使用了約萬只貓進行試驗研究。而在中國,試驗用貓的年使用量也在不斷增加,據(jù)文獻報道,每年浙江省的藥品質(zhì)量監(jiān)測就需要使用400-500只試驗用貓。 貓的原代肝細胞和肝微粒體是不可或缺的研究材料。通過對貓的肝細胞進行體外研究,可以更加準確地評估藥物的代謝和毒性,為藥物研發(fā)提供重要的參考依據(jù)。此外,貓的原代肝細胞還可以用于疾病模型的建立和藥物療效的評估,為Clinical Treatment提供重要的支持。 然而,試驗用貓的使用也引起了一些爭議。一些動物保護組織認為,試驗用貓的使用會對動物造成痛苦和傷害,應(yīng)該盡量減少或避免使用。因此,科研人員需要在確保研究質(zhì)量的前提下,盡可能地減少試驗用貓的使用,采用替代方法和技術(shù),以保障動物福利和人類健康。原代肝細胞可以用于研究肝臟的再生和修復(fù),可以幫助人們更好地了解肝臟移植和liver cance?;葜葚i原代肝細胞純化
原代肝細胞的分離方法有很多種,以下是其中幾種常見的方法:1.膠原酶消化法:膠原酶是一種使用廣的細胞分離酶,可以消化肝細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白,從而使肝細胞分離出來。該方法通常使用膠原酶消化肝臟組織,然后通過離心和過濾等步驟分離肝細胞。2.機械分離法:機械分離法是一種通過物理方法分離肝細胞的方法。該方法通常使用攪拌器、濾網(wǎng)或離心等設(shè)備將肝臟組織中的肝細胞分離出來。3.酶消化結(jié)合機械分離法:這種方法是將膠原酶消化和機械分離相結(jié)合的方法。該方法通常先使用膠原酶消化肝臟組織,然后通過機械分離的方法將肝細胞分離出來。4.密度梯度離心法:密度梯度離心法是一種通過離心的方法分離肝細胞的方法。該方法通常使用密度梯度介質(zhì)(如Percoll或Ficoll)將肝細胞分離出來。以上是幾種常見的原代肝細胞分離方法,不同的方法適用于不同的實驗需求和研究目的。在選擇分離方法時,需要考慮肝臟組織的來源、肝細胞的數(shù)量和質(zhì)量、實驗?zāi)康牡纫蛩亍?江蘇草魚原代肝細胞培養(yǎng)方法立沃生物的原代肝細胞配套有有多種細胞培養(yǎng)技術(shù)支持,可以為客戶提供多維度的細胞培養(yǎng)技術(shù)支持解決方案。
原代肝細胞的2D培養(yǎng)模型是一種常用的實驗方法,用于研究肝細胞的生物學(xué)特性和功能。 原代肝細胞的2D培養(yǎng)模型具有許多優(yōu)點。首先,該模型可以提供一定量的原代肝細胞,使研究人員能夠進行大規(guī)模的實驗研究。其次,該模型提供了一個穩(wěn)定的環(huán)境,使研究人員能夠更好地控制原代細胞的生長和分化,以及研究肝細胞在不同條件下的反應(yīng)和功能。此外,該模型還提供了一種簡單、快速和經(jīng)濟的方法,用于評估藥物的毒性和療效,以及研究原代肝細胞在不同疾病狀態(tài)下的反應(yīng)和功能。 原代肝細胞的2D培養(yǎng)模型也存在一些限制。首先,該模型只能提供有限的原代肝細胞數(shù)量,因為原代肝細胞在體外的壽命較短,容易失去其生物學(xué)特性和功能。其次,該模型無法完全模擬肝臟在體內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境,因此可能無法準確預(yù)測原代肝細胞在體內(nèi)的反應(yīng)和功能。此外,該模型也存在一些技術(shù)挑戰(zhàn),如原代肝細胞分離和培養(yǎng)條件的優(yōu)化等。 原代肝細胞的2D培養(yǎng)模型是一種重要的實驗方法,可以用于研究原代肝細胞的生物學(xué)特性和功能,以及評估藥物的毒性和療效。雖然存在一些限制,但該模型仍然是原代肝細胞研究的重要工具之一。
原代肝細胞也廣泛應(yīng)用于嵌合體肝模型當中。通過將正常人原代肝細胞移植到患有嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中,可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達能夠促使鼠肝細胞死亡,從而為人原代肝細胞的移植、重建和增殖提供了一個適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi),人肝細胞占據(jù)了大約75%的比例,并且能夠持續(xù)高水平地表達人血清蛋白。 通過使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠,研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測到病毒的RNA。然而,病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機制提供了新的途徑,并為開發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。 此外,這項研究還為研究肝細胞移植和重建提供了新的實驗?zāi)P?。通過將人原代肝細胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中,研究人員可以更好地研究原代肝細胞的生長、分化和功能,從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項研究的結(jié)果具有重要的臨床意義,有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。立沃生物科技有限公司原代肝細胞是從健康肝臟中提取后體外培養(yǎng)的,保留了肝臟的特性和功能。
貼壁培養(yǎng)是一種常用的細胞培養(yǎng)方法,可以使原代肝細胞在培養(yǎng)皿表面附著生長,形成單層細胞群落。原代肝細胞的貼壁培養(yǎng)需要注意以下幾點: 1. 分離和準備細胞:從新鮮的動物肝臟中分離出原代肝細胞后,需要進行細胞計數(shù)和質(zhì)量檢測,確保細胞數(shù)量和質(zhì)量符合要求。 2. 培養(yǎng)基的選擇:原代肝細胞的培養(yǎng)基需要選擇適合其生長和代謝的培養(yǎng)基,常用的培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640等。 3. 培養(yǎng)皿的涂層:為了使原代肝細胞能夠附著生長,需要在培養(yǎng)皿表面涂層一定濃度的膠原蛋白、明膠或者其他細胞黏附因子。 4. 細胞接種和培養(yǎng):將準備好的原代肝細胞接種到涂層好的培養(yǎng)皿中,加入適量的培養(yǎng)基,放入恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。需要注意的是,原代肝細胞的培養(yǎng)時間較短,一般在3-5天左右,因此需要及時更換培養(yǎng)基和進行細胞觀察。 原代肝細胞的貼壁培養(yǎng)可以通過在培養(yǎng)皿上加一定的的吸附涂層來達到讓原代肝細胞快速貼壁的效果。立沃生物的原代肝細胞配套提供制度完備的細胞培養(yǎng)服務(wù),為客戶提供個性化的解決方案。河北人體原代肝細胞培養(yǎng)技巧
用原代肝臟細胞進行Organoid搭建,還原體內(nèi)肝臟的狀態(tài),能極大地減少實驗的誤差和傳統(tǒng)藥篩的成本。惠州豬原代肝細胞純化
原代肝細胞的體外培養(yǎng)和研究有著很大的應(yīng)用范圍。原代肝細胞(Primary hepatocytes)是指從動物肝臟取出后立即培養(yǎng)的肝細胞。原代肝細胞作為一種體外模型,具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點:1.與體內(nèi)環(huán)境保持一致,酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度,可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性;2.較好保留和維持了肝細胞的完整形態(tài)和肝細胞體外代謝活性,真實反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。3.隨著技術(shù)水平的不斷提高,原代培養(yǎng)的動物和人肝細胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究:4.探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究;5.評價藥物和外源性物質(zhì)對肝臟中細胞色素P450酶誘導(dǎo)作用并探討其誘導(dǎo)機制;6.預(yù)測和解釋藥物與藥物之間的相互作用;7.研究藥物的細胞毒性等。因此了解或者掌握原代肝細胞體外培養(yǎng)和研究的相關(guān)技術(shù)對于提升相關(guān)試驗的成功率非常有幫助?;葜葚i原代肝細胞純化