進(jìn)行了酵母雙雜交文庫的篩選,結(jié)果顯示鈣依賴的種子特異性蛋白激酶SPK可以與OsNF-YB9相互作用,分段截取互作驗(yàn)證顯示OsNF-YB9的N端是互作所必須的(圖a-b),并通過雙熒光分子互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)、BiFC、體外GST-pulldown實(shí)驗(yàn)得以證實(shí)(圖c-e)。亞細(xì)胞定位顯示SPK主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),OsNF-YB9在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有表達(dá),共表達(dá)SPK和OsNF-YB9***促進(jìn)了OsNF-YB9的入核(圖f),表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促進(jìn)了OsNF-YB9從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的運(yùn)輸。RT-PCR顯示SPK在發(fā)育中的種子中高表達(dá),在5DAF開始***,并在10-30DAF維持高表達(dá)水平(圖a-b)。spk敲除突變體種子中堊白率的增加(圖c-e),但粒形和粒重與野生型沒有***差別。酵母單雙雜交服務(wù)促銷季技術(shù)服務(wù)。河南歐易生物酵母文庫
酵母文庫實(shí)驗(yàn)由歐易生物完成。6.902)在線發(fā)表了題為“MKK4-MPK3-WRKY17-mediated salicylic acid degradation increases susceptibility to Glomerella leaf spot in apple”的研究論文,報(bào)道了一個(gè)蘋果炭疽葉枯病易感相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子 MdWRKY17,并對其作用機(jī)制進(jìn)行了詳細(xì)探討。蘋果是世界上頗受歡迎的水果。蘋果炭疽葉枯病(Glomerellaleafspot,GLS)在我國多次爆發(fā),是蘋果相當(dāng)有毀滅性的***病害之一,嚴(yán)重影響蘋果質(zhì)量和產(chǎn)量。但目前在蘋果中尚未鑒定出GLS的抗性基因。湖北建庫酵母文庫做什么為在校期間為實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建3個(gè)高效的水稻酵母雙雜交文庫。
酵母文庫實(shí)驗(yàn):MAPK級聯(lián)***是植物防御病原體入侵信號傳導(dǎo)過程中的關(guān)鍵事件,MAPKs靶向并磷酸化調(diào)節(jié)下游基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子,**終響應(yīng)病原菌的侵入。WRKYs轉(zhuǎn)錄因子是MAPK級聯(lián)的重要目標(biāo),在植物對各種病原體的抗性中起著關(guān)鍵作用。蘋果如何響應(yīng)炭疽菌入侵,將信號傳導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi),以及哪個(gè)轉(zhuǎn)錄因子負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)促進(jìn)GLS耐受均尚不清楚。本研究在蘋果炭疽葉枯病易感品種“嘎拉”中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)由蘋果炭疽菌******誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子MdWRKY17。在6個(gè)易感蘋果種質(zhì)中,MdWRKY17表達(dá)水平***高于6個(gè)耐受蘋果種質(zhì),同時(shí)對應(yīng)的水楊酸含量降低,證實(shí)了MdWRKY17介導(dǎo)的水楊酸降解在GLS耐受中的關(guān)鍵作用。
酵母雙雜交文庫:本研究通過7個(gè)樹齡的油松樣品轉(zhuǎn)錄組測序,鑒定到一個(gè)與年齡信號***相關(guān)的基因模塊,該模塊包含33個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,包括SOC1-like、DAL1等。油松和晚坐果白皮松突變體中的基因表達(dá)模式分析顯示,PtMADS11與生殖能力之間存在緊密相關(guān)性。酵母雙雜交顯示,MADS11和DAL1直接相關(guān)作用以參與對年齡信號的調(diào)控。過表達(dá)PtMADS11、PDAL1可以部分挽救擬南芥中miR156過表達(dá)或spl突變導(dǎo)致的開花延遲缺陷。只有PtMADS11可以挽救ft突變體中的開花缺陷,表明它與PtDAL1在擬南芥開花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮了不同的作用。合作文章上百篇,平均影響因子高達(dá)7.124 歐易生物酵母文庫。
酵母單雜交結(jié)果顯示,磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子OsPHR1/2/3可以***51個(gè)目標(biāo)啟動子中的25個(gè),包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調(diào)控許多菌根共生相關(guān)基因的表達(dá)(圖A)。對叢枝菌根共生響應(yīng)基因啟動子序列預(yù)測分析顯示,有78個(gè)轉(zhuǎn)錄因子被富集,87%的菌根共生響應(yīng)基因受到OsPHR1/2/3的調(diào)控,其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調(diào)控。因此推測OsPHR1/2/3可能是菌根共生調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控樞紐(圖A-B)。EMSA和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí),OsPHR12可以直接結(jié)合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動子序列(圖C-F),并且這種結(jié)合依賴于啟動子中的P1BS元件(圖G)。酵母結(jié)構(gòu)及功能介紹酵母的應(yīng)用 。黑龍江技術(shù)酵母文庫做什么
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酵母雙雜交(Y2H):植物轉(zhuǎn)錄因子(Plant transcripter factors, TFs)是調(diào)控植物生長發(fā)育和環(huán)境適應(yīng)性的關(guān)鍵分子。雖然在一些數(shù)據(jù)庫中,如RiceSRTFDB (Priya and Jain, 2013), Ricettissuetfdb (Chen et al.,PlnTFDB (Pérez-Rodríguez et al., 2009)和PlantTFDB (Jin et al., 2017),可以預(yù)測水稻轉(zhuǎn)錄因子功能。但通過具體實(shí)驗(yàn)研究,來直接證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子對植物的調(diào)控作用仍然是必不可少的。酵母雙雜交(Y2H)和酵母單雜交(Y1H)是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技術(shù)。為了方便和促進(jìn)水稻育種研究,陳凡老師與歐易生物達(dá)成合作,整合雙方優(yōu)勢資源,歷經(jīng)春秋與冬夏,成功構(gòu)建了基于粳稻(日本晴)基因組的水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫。該項(xiàng)成果以“一種高效的篩選系統(tǒng)來鑒定大米轉(zhuǎn)錄因子的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-DNA相互作用伙伴”為題,發(fā)表于雜志JGG上。河南歐易生物酵母文庫
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