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根據(jù)培養(yǎng)基的用途來(lái)區(qū)分,可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。a.選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)以殺死或壓抑不需要的菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等壓抑原核微生物的生長(zhǎng);而制霉菌素、灰黃霉素等能壓抑真核微生物的生長(zhǎng);結(jié)晶紫能壓抑革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng)等。b.增殖培養(yǎng)基在自然界中,不同種的微生物常生活在一起,為了分離我們所需要的微生物,在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以增加這種微生物的繁殖速度,逐漸淘汰其它微生物,這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。在某種程度上講,增殖培養(yǎng)基也是一種選擇培養(yǎng)基。c.鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品,使難以區(qū)分的微生物經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別,因而有助開(kāi)快速鑒別某種微生物。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):容器可自行拆卸更換和消毒,操作方便。重慶瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:1.水:除特定要求,實(shí)驗(yàn)室用水的電導(dǎo)率在25℃下應(yīng)不高于25uS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應(yīng)不超過(guò)103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應(yīng)根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗(yàn)微生物的污染。2.稱量和復(fù)水:稱量所需量的脫水培養(yǎng)基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝:脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時(shí),重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱溶解前應(yīng)浸泡幾分鐘。寧夏全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分普遍。
制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過(guò)菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置過(guò)來(lái),平放在恒溫箱里,24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌,即可用來(lái)培養(yǎng)微生物。
在制備培養(yǎng)基時(shí),通常要考慮以下因素:(1)pH值多數(shù)細(xì)胞系在pH=7.4下生長(zhǎng)得很好。盡管各細(xì)胞株之間細(xì)胞生長(zhǎng)*pH值變化很小,但一些正常的成纖維細(xì)胞系以pH=7.4~7.7,轉(zhuǎn)化細(xì)胞以pH=7.0~7.4更合適。據(jù)報(bào)道,上皮細(xì)胞以pH=5.5合適。為確定*佳pH值,做一個(gè)簡(jiǎn)單的生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)或特殊功能分析酚紅常用作指示劑,pH=7.4呈紅色,pH=7.0變橙色,pH=6.5變黃色,而pH=7.6呈紅色中略帶藍(lán)色,pH=7.8呈紫色。由于對(duì)顏色的觀察有很大的主觀性,因而必須用無(wú)菌平衡鹽溶液和同樣濃度的酚紅配一套標(biāo)準(zhǔn)樣,放在與制備培養(yǎng)基相同的瓶子中。(2)緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。(3)滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測(cè)定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過(guò)測(cè)定滲透壓防止稱量和稀釋等造成的誤差。培養(yǎng)基制備器解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
配制培養(yǎng)基需要哪些制備:(1)稱出規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖,加水直到培養(yǎng)基較終容積的34,加熱溶解,完全融解后的溶液是透明的。在配制液體培養(yǎng)基(不加瓊脂)時(shí)無(wú)需加熱。(2)按需要加入一定量的各種貯存母液,包括生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他特殊附加物。吸取母液要使用專一的移液管。如有必要,培養(yǎng)基中所需的維生素,可在高壓滅菌之后通過(guò)減壓過(guò)濾裝置或微孔過(guò)濾器滅菌后再加入。(3)蒸餾水定容。充分混合后調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,一般以5.66.0為好。(4)培養(yǎng)基分裝,分裝量一般以占培養(yǎng)容器的1514為宜。之后在24h內(nèi)完成高壓滅菌,也可以高壓滅菌后再進(jìn)行培養(yǎng)基的無(wú)菌分裝,室溫下存放備用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基應(yīng)放置于10攝氏度下保存,而含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基在45攝氏度保存更佳。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。寧夏全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。重慶瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器
簡(jiǎn)單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個(gè)主要步驟:需要選擇培養(yǎng)基配方,同一種培養(yǎng)基,其表達(dá)方式往往存在著差異。所以,除了應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法的規(guī)定編制之外,我們一般應(yīng)盡可能收集有關(guān)數(shù)據(jù),加以比較和核對(duì),然后根據(jù)自己的目的選擇和記錄數(shù)據(jù)來(lái)源。需記錄培養(yǎng)基的制備,培養(yǎng)基的制備記錄包括培養(yǎng)基的名稱、配方及其來(lái)源、pH值、滅菌溫度、時(shí)間、配制日期、制備人等,并且要復(fù)印記錄和保存原始記錄備查。對(duì)副本的記錄應(yīng)該和培養(yǎng)基一起保存,以防出現(xiàn)混亂。需稱重培養(yǎng)基的成分,培養(yǎng)基成分要準(zhǔn)確稱量,并注意防止混淆。每一種成分稱量完畢后,都要在分裝的一面打上記號(hào),然后將分裝的藥物一起放在左邊。每一個(gè)成分稱量完之后,都會(huì)向右移動(dòng)。全部稱量完畢,應(yīng)再次檢查。重慶瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器
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