外泌體用于細(xì)胞學(xué)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的無菌處理 已經(jīng)經(jīng)過上述方法制備的外泌體在進(jìn)行細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之前還需進(jìn)行一步除菌過濾，這個(gè)時(shí)候考慮到得率，應(yīng)該采用離心法處理，以減少過濾時(shí)的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對(duì)樣品進(jìn)行澄清[目錄號(hào)SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon? Ultra-15 超濾管(目錄號(hào)UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g離心 X 10 min。 從超濾...

特別推薦應(yīng)用（提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告作為參考） Microcon?超濾管： Microcon?PCR 級(jí)超濾管： ? 法醫(yī)鑒定分析的DNA樣品制備 ? 生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換 ? 體外合成mRNA的純化 ? 以人mRNA或總RNA制備熒光DNA探針 ? 游離標(biāo)記物的去除 ? 納克級(jí)核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 ? 替代乙醇沉淀，離心法高效濃縮基因組DNA 應(yīng)用指南 典型應(yīng)用 肽及生長(zhǎng)因子濃縮 蛋白濃縮與脫鹽 電泳等操作前的蛋白樣品濃縮 HPLC前去除蛋白 組織培養(yǎng)抽提物和細(xì)胞裂解液中大分子成分的純化 生物樣本濃縮（抗原，抗體，酶等） 從含有SD...

樣品的澄清、過濾和除菌 Ultrafree?-MC和Ultrafree?-CL微濾管 Ultrafree?-MC（0.5mL）和Ultrafree?-CL（2mL）是一次性使用的微濾離心管，可以用于各種水性樣品和在某些溶劑中的樣品除顆粒物、除沉淀的處理。提供兩種體積及多種膜孔徑以及已經(jīng)經(jīng)過無菌處理的產(chǎn)品供選擇。Ultrafree?微濾離心管操作簡(jiǎn)便、樣品回收率高且重復(fù)性很好，是蛋白和核酸樣品處理的理想選擇。 特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn) 有0.1-5.0μm五種膜孔徑供選擇 采用高回收率的親水Durapore? (PVDF)膜和親水PTFE膜 提供無菌包裝和非無菌包裝形式產(chǎn)品 過濾速度快，數(shù)據(jù)穩(wěn)定...

Amicon? Ultra 4 mL 超濾管 -離心速度快而保持很高的回收率 4 種不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon? Ultra 4mL 超濾管中濃縮（3kDa 細(xì)胞色素 C， 10kDa 細(xì)胞色素 C，30kDa BSA，100kDa IgG）， 測(cè)定在離心一定時(shí)間后的回收率。數(shù)據(jù)顯 示所有樣品在離心 15 分鐘左右回收率均 >95%。 為了方便初次使用者選擇**合適的超 濾管產(chǎn)品，默克密理博生命科學(xué)部網(wǎng) 站上提供選擇指引，您需要按照提 示進(jìn)行選擇，**終會(huì)選出一款產(chǎn)品。 為每次實(shí)驗(yàn)選擇**合適的， 您也能快速成為超濾高手！超濾濃縮管具體報(bào)價(jià)多少呢。虹口區(qū)...

這種小管適合在1.5mL離心機(jī)中使用，其Ultracel?超濾膜對(duì)于蛋白及其它成分都表現(xiàn)出 極低的非特異性結(jié)合，連同醫(yī)藥級(jí)O型圈封閉設(shè)計(jì)，確保更少的樣品丟失，更穩(wěn)定的數(shù)據(jù)結(jié)果。諸多考慮周到的精細(xì)設(shè)計(jì)使Microcon?成為比較好用的樣品制備工具之一。 特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)： 低吸附膜和反轉(zhuǎn)回收設(shè)計(jì)，即使是小體積、低濃度樣品得率也能達(dá)到95%以上 可以用產(chǎn)品自帶的1.5mL樣品收集管存儲(chǔ)濾過液和濃縮產(chǎn)物 濃縮倍數(shù)可達(dá)100X 操作簡(jiǎn)便快捷，易于標(biāo)準(zhǔn)化。 Microcon? DNA Fast Flow 超濾管 專門設(shè)計(jì)用于從含有SDS的溶液中濃縮和回收基因組DNA。管子和膜均為低非特異性吸附...

特別推薦應(yīng)用（提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告作為參考） Microcon?超濾管： Microcon?PCR 級(jí)超濾管： ? 法醫(yī)鑒定分析的DNA樣品制備 ? 生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換 ? 體外合成mRNA的純化 ? 以人mRNA或總RNA制備熒光DNA探針 ? 游離標(biāo)記物的去除 ? 納克級(jí)核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 ? 替代乙醇沉淀，離心法高效濃縮基因組DNA 應(yīng)用指南 典型應(yīng)用 肽及生長(zhǎng)因子濃縮 蛋白濃縮與脫鹽 電泳等操作前的蛋白樣品濃縮 HPLC前去除蛋白 組織培養(yǎng)抽提物和細(xì)胞裂解液中大分子成分的純化 生物樣本濃縮（抗原，抗體，酶等） 從含有SD...

用超濾對(duì)分子進(jìn)行分級(jí) 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實(shí)際。事實(shí)上，膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質(zhì)。一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時(shí)比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留?；旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡(jiǎn)單和容易。實(shí) 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應(yīng)該達(dá)到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間，則可達(dá)到比較理想的 分離...

蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的**終濃度不超過 20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進(jìn)方法是： 1）離心力降為推薦離心力的30%-50% 2）改用截留分子量更大的超濾管（如原本選用10k，此時(shí)可以選擇30k） 3）在濃縮過程中取出超濾管，用***頭反復(fù)吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮 Amicon? Ultra超濾膜中含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)先用0.1 N NaOH清洗再離心。***用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤濕狀態(tài)，避免重新干燥。一個(gè)好的超濾濃縮管代理銷售需要具備哪些...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細(xì)胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據(jù)樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標(biāo)外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達(dá)到更好的得率和操作體驗(yàn)。 樣品體積大于 30mL 時(shí)可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請(qǐng)注意攪拌式超濾杯在200mL 以內(nèi)時(shí)吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進(jìn)一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應(yīng)抗體的磁珠進(jìn)行親...

7次低速離心，總耗時(shí)~100分鐘（含60分鐘孵育時(shí)間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂（50%懸濁液）和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h，其間可溫和攪動(dòng)促進(jìn)結(jié)合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結(jié)合雜質(zhì)。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（可選用50k MWCO型號(hào)）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入2...

加入漂洗緩沖液（體積是樹脂柱床體積的7.5倍）并離心。< 500μL樹脂時(shí)1,000×g離心1 min；≥ 500μL樹脂時(shí)2,000×g離心4 min。 4. 使用一個(gè)新的50 mL離心管作為收集管。 5. 加入洗脫緩沖液（體積是樹脂柱床體積的5倍）與樹脂混勻并離心。< 500μL樹脂時(shí)1,000×g離心1 min；≥ 500μL樹脂時(shí)2,000×g離心4 min?；厥展苤屑醇兓玫牡鞍?。 6. 如果是純化抗體，在純化產(chǎn)物中加入中和緩沖液。 * 進(jìn)行較大體積操作時(shí)，可以延長(zhǎng)結(jié)合反應(yīng)時(shí)間，并用膠帶密封上樣池上沿以便顛倒混勻操作。離心前去除膠帶即可。選購不帶Amicon? Ultra 0...

通量（超濾效率）及其影響因素 超濾過程中需要在速率和回收率之間平衡以期獲得比較好的效果。濾膜的 通量的定義是流量除以面積，使用高 NMWL 濾膜可以增加通量，但同時(shí) 會(huì)降低回收率。選擇膜和裝置時(shí)需要同時(shí)考慮截留分子量和通量。而參 與影響通量的因素很多，包括： 壓力：較為稀釋的蛋白溶液或膠體懸液進(jìn)行超濾時(shí)，流量隨著跨膜壓力 （TMP）的增大而增加。正壓條件下操作，如 Stirred Cell 攪拌式超濾杯， 這種因素影響較為明顯。如果極化影響***，通量會(huì)達(dá)到一個(gè)平臺(tái)，甚 至可能隨著壓力的增加而降低。超濾濃縮管的主要優(yōu)勢(shì)是什么。奉賢區(qū)默克4ml超濾濃縮管提供的超濾管是沒有經(jīng)過去內(nèi)...

用于攪拌式超濾杯的Ultracel?預(yù)切超濾膜片 Ultracel? 再生纖維素膜可以用來對(duì)較為稀釋的溶液進(jìn)行脫鹽或濃縮。Ultracel? 膜是親水性的，微觀結(jié)構(gòu)緊密，確保對(duì)蛋白、核酸等大分子吸附比較低而回收率比較高。 *膜的常規(guī)截留分子量分為1, 3, 5, 10, 30及 100 kDa等。 *膜片直徑分為25, 44.5, 47, 63.5, 76, 90及150 mm。 對(duì)于大體積、高濃度（如蛋白濃度大于 1.0 mg/mL）的樣品進(jìn)行脫鹽和濃縮，Biomax?聚苯醚砜（PES）超濾膜是很好的選擇。血清、血漿或條件組織培養(yǎng)基等，都是 Biomax?超濾膜適合處理的樣品。 *...

對(duì)于慢***推薦Amicon? Ultra 100kDa; 對(duì)于腺***推薦Amicon? Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考***濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產(chǎn)品使用說明書。另提供AAV（腺相關(guān)***）的制備方法供參考。 去污劑因其獨(dú)特的性質(zhì)，當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時(shí)，去污劑分子會(huì)聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象，這有可能會(huì)影響去污劑的去除效果。 Amicon? Ultra超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析，可用緩沖液或Milli-Q?水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N N...

Centrifree?過濾器 Centrifree? 過濾器擁有研究及體外診斷證書（美國適用），是為臨床研究實(shí)驗(yàn)室的樣品制備而設(shè)計(jì)的，能夠快速、高效地通過超濾去除小體積（0.15–1.0 mL）血清、血漿等生物樣品中的蛋白未結(jié)合的小分子溶質(zhì)。數(shù)分鐘之內(nèi)完成精確的分離，樣品終體積約為 10μL；不會(huì)發(fā)生樣品稀釋、pH 值變化、離子成分變化或未結(jié)合小分子溶質(zhì)濃縮等情況。這種產(chǎn)品使用的是低吸附的再生纖維素膜，親水膜和 O 型圈，不含增塑劑，確保獲得較好的樣品回收效果。 優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用： 分離血清、血漿等生物學(xué)樣品中未 吸附的小分子物質(zhì) 精確的藥物結(jié)合實(shí)驗(yàn)樣品制備使用 去除生物樣品中的蛋白質(zhì)等...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時(shí)節(jié)省過濾時(shí)間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計(jì)，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據(jù)NMWL分級(jí)，有時(shí)也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數(shù)大于這個(gè)值的分子將在超濾時(shí)截留。一個(gè)確定NMWL的超濾膜應(yīng)該截留至少90%以上的這個(gè)大小的球形分子。但為了保險(xiǎn)起見，實(shí)踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時(shí) 膜截留分子量應(yīng)該充分大于流過的溶質(zhì)。當(dāng)膜材料相同時(shí)，孔徑減小 會(huì)增加排阻而減小濾過率。截留及產(chǎn)物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質(zhì)、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設(shè)備構(gòu)...

用超濾對(duì)分子進(jìn)行分級(jí) 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實(shí)際。事實(shí)上，膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質(zhì)。一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時(shí)比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留?；旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡(jiǎn)單和容易。實(shí) 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應(yīng)該達(dá)到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間，則可達(dá)到比較理想的 分離...

離心方式的超濾方法進(jìn)行溶液置換也被稱為“滲濾”，操作時(shí)樣品首先被濃縮，繼而加入新的溶液，再次濃縮時(shí)，原溶液已經(jīng)被換成選定的溶液。 化學(xué)相容性與溶出 樣品的化學(xué)背景有時(shí)很多樣而復(fù)雜，過濾的過程中很重要的一點(diǎn)是操作過程不應(yīng)給樣品帶來新的污染。所以濾膜和裝置與樣品接觸的其它部分都不能與樣品中的化學(xué)成分發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生溶出污染。關(guān)于默克密理博各種微濾、超濾產(chǎn)品的化學(xué)相容性請(qǐng)參考產(chǎn)品使用說明書或垂詢技術(shù)支持專線 。回收率及其重要性超濾的**終目的常常是很大程度地回收目標(biāo)溶質(zhì)，但膜的很多特性會(huì)對(duì)這一目的產(chǎn)生影響。影響回收的因素包括：? 標(biāo)稱分子量限制（NMWL）/ 核酸截留分子量（NCO）? 截留 ...

外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體：300μg樣品（相當(dāng)于300μg總蛋白）用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋，與protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯(lián)在磁珠上（以避免抗體洗脫下來對(duì)外泌體的干擾），請(qǐng)參考默克磁珠操作說明書。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推薦使用試劑目錄號(hào)信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經(jīng)建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細(xì)胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據(jù)樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標(biāo)外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達(dá)到更好的得率和操作體驗(yàn)。 樣品體積大于 30mL 時(shí)可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請(qǐng)注意攪拌式超濾杯在200mL 以內(nèi)時(shí)吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進(jìn)一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應(yīng)抗體的磁珠進(jìn)行親...

多臺(tái)同時(shí)操作模式 借助Amicon?超濾杯多臺(tái)操作連接裝置可以同時(shí)運(yùn)行多達(dá)3個(gè)超濾杯。 Amicon? stirred cells 耐溶劑型攪拌式超濾杯 用于對(duì)在有機(jī)溶劑中的樣品進(jìn)行濃縮和緩沖液置換。有 47mm 和 76mm 兩種規(guī)格。需要注意醛、酮（如**）、醚酯等會(huì)降低碳氟化合物材質(zhì) O 形圈的使用壽命。 特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)： 采用圓柱形硼硅酸鹽玻璃容器和 PTFE 超好化學(xué)兼容性超濾膜 可預(yù)裝膜后進(jìn)行高壓滅菌 直接從上面操作，避免拆卸裝置的麻煩 組件少，易于清潔和組裝 配套使用 47 或 76 mm 直徑預(yù)切膜片 應(yīng)用： 帶有有機(jī)成分的樣品的濃縮、換液Millipore...

無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細(xì)胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據(jù)樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標(biāo)外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達(dá)到更好的得率和操作體驗(yàn)。 樣品體積大于 30mL 時(shí)可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請(qǐng)注意攪拌式超濾杯在200mL 以內(nèi)時(shí)吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進(jìn)一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應(yīng)抗體的磁珠進(jìn)行親...

Minicon?濃縮器 Minicon? 濃縮器用于在電泳或免疫電泳分析前對(duì)尿液和腦脊液進(jìn)行濃縮，以增強(qiáng)對(duì)不正?；虿B(tài)的蛋白質(zhì)（例如尿中的 Bence Jones 蛋白）的識(shí)別。B15型有 8 個(gè)濃縮單元，用于 5mL 樣本的處理；CS15型有 10 個(gè)濃縮單元，適合 2.5mL 樣品的處理。溶劑和鹽分通過超濾被吸收劑吸收而樣品被濃縮。 優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用 靜態(tài)濃縮器，不需要其它輔助裝置 濃縮倍數(shù)達(dá)到 100 倍，樣品終體積小 同時(shí)濃縮多個(gè)臨床樣品 特別推薦用于尿液、腦脊液等的蛋白 富集分析超濾濃縮管的主要優(yōu)勢(shì)是什么。金山區(qū)默克2ml超濾濃縮管批發(fā)提供的超濾管是沒有經(jīng)過去內(nèi)***處理的，...

如果能確保用同樣的超濾管對(duì)其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個(gè)目的蛋白的原因。有時(shí)蛋白會(huì)因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級(jí)別的超濾管（如原本選用30k，此時(shí)可以選擇10k）。 2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么： a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？ b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具體解決方法請(qǐng)參考上面的關(guān)于蛋白沉淀問題的解釋。超濾濃縮管的好處都有很多。奉賢區(qū)默克2ml超濾濃縮管聯(lián)系人高通量超濾 MultiScreen?超濾膜板 MultiScreen? 超濾膜板是實(shí)現(xiàn)高通量生物樣品處理的...

7次低速離心，總耗時(shí)~100分鐘（含60分鐘孵育時(shí)間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂（50%懸濁液）和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h，其間可溫和攪動(dòng)促進(jìn)結(jié)合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結(jié)合雜質(zhì)。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（可選用50k MWCO型號(hào)）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入2...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時(shí)節(jié)省過濾時(shí)間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計(jì)，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據(jù)NMWL分級(jí)，有時(shí)也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數(shù)大于這個(gè)值的分子將在超濾時(shí)截留。一個(gè)確定NMWL的超濾膜應(yīng)該截留至少90%以上的這個(gè)大小的球形分子。但為了保險(xiǎn)起見，實(shí)踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時(shí) 膜截留分子量應(yīng)該充分大于流過的溶質(zhì)。當(dāng)膜材料相同時(shí)，孔徑減小 會(huì)增加排阻而減小濾過率。截留及產(chǎn)物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質(zhì)、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設(shè)備構(gòu)...

將裝有樣品的Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管接在Amicon?Pro上樣池的下端。 3. Amicon?Pro上樣池內(nèi)加入預(yù)先準(zhǔn)備好的1.5 mL含有染料的反應(yīng)混合液。 4. 4,000×g離心15 min。 5. 優(yōu)化選做：將樣品在室溫下多孵育30 min。 6. 上樣池中加入1.5 mL PBS± NaN3。 7. 4,000×g離心15 min換液同時(shí)濃縮。 8. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管1,000×g離心回收標(biāo)記好的抗體。 特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)： 特別的反轉(zhuǎn)離心回收設(shè)計(jì)，滯留體積很小，樣品損失少， 樣品回收率通常>90% 濃縮倍數(shù)達(dá)到50-20...

雖然影響因素較多，我們通常建議截留分子量約為目的分子分子量一半的膜，這樣可以比較大化樣品的回收，同時(shí)節(jié)省過濾時(shí)間。截留微濾中膜的孔徑大小通常以微米計(jì)，表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據(jù)NMWL分級(jí)，有時(shí)也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多數(shù)大于這個(gè)值的分子將在超濾時(shí)截留。一個(gè)確定NMWL的超濾膜應(yīng)該截留至少90%以上的這個(gè)大小的球形分子。但為了保險(xiǎn)起見，實(shí)踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時(shí) 膜截留分子量應(yīng)該充分大于流過的溶質(zhì)。當(dāng)膜材料相同時(shí)，孔徑減小 會(huì)增加排阻而減小濾過率。截留及產(chǎn)物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質(zhì)、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設(shè)備構(gòu)...

Amicon? Ultra 4 mL 超濾管 -離心速度快而保持很高的回收率 4 種不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon? Ultra 4mL 超濾管中濃縮（3kDa 細(xì)胞色素 C， 10kDa 細(xì)胞色素 C，30kDa BSA，100kDa IgG）， 測(cè)定在離心一定時(shí)間后的回收率。數(shù)據(jù)顯 示所有樣品在離心 15 分鐘左右回收率均 >95%。 為了方便初次使用者選擇**合適的超 濾管產(chǎn)品，默克密理博生命科學(xué)部網(wǎng) 站上提供選擇指引，您需要按照提 示進(jìn)行選擇，**終會(huì)選出一款產(chǎn)品。 為每次實(shí)驗(yàn)選擇**合適的， 您也能快速成為超濾高手！上海超濾濃縮管代理銷售哪家好？默...

Amicon? Ultra超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博特有的 Ultracel? 再生纖維素膜，生產(chǎn)工藝嚴(yán)格，截留分子量明確而精細(xì)，蛋白吸附損失基本上大概小。 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少？ 按照經(jīng)驗(yàn)，建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）。 Amicon? Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對(duì)滅菌處理的具體方法沒有做相關(guān)的測(cè)試，所以無法提供更進(jìn)一步的參考信息。 Amicon? Ultra都是采用熱封設(shè)計(jì)，不可以用高壓高溫滅菌。 不保證超濾管不包含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2小時(shí)，以完全滅活RNA酶；殘留的DEPC可以用...