廣東Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組（組織、細(xì)胞）、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析，揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù)：非靶向蛋白組學(xué)：蛋白質(zhì)定性（膠條鑒定和溶液鑒定），高通量定量蛋白組（Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量），多肽組學(xué)。在未來(lái)的發(fā)展中，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤V東Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：飛行時(shí)間質(zhì)譜：MALDI的基本原理是將分析物分散在基質(zhì)分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶體，當(dāng)用激光（337nm的氮激光）照射晶體時(shí)，基質(zhì)分子吸收激光能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使樣品分子電離。它從固相標(biāo)本中產(chǎn)生離子，并在飛行管中測(cè)定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用于肽質(zhì)量指紋圖譜，非?？焖伲看畏治鲋恍?~5min），靈敏（達(dá)到fmol水平），可以精確測(cè)量肽段質(zhì)量，但是如果在分析前不修飾肽段，MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。貴陽(yáng)修飾蛋白組學(xué)一般流程定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記（label）和非標(biāo)記（label free）定量策略。

Labelfree非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)特點(diǎn)：（1）不需要標(biāo)記處理，操作簡(jiǎn)單，成本低、實(shí)驗(yàn)周期短；（2）每個(gè)樣品單獨(dú)處理、上機(jī)；（3）可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量，樣品類(lèi)型不受限制；（4）對(duì)單個(gè)樣品的蛋白總量要求相對(duì)較低，對(duì)于組織本身蛋白量不高，可以選擇Label-Free，適用于一些難收集樣品；（5）定性沒(méi)有問(wèn)題，但是定量的準(zhǔn)確性較標(biāo)記定量稍差，會(huì)受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響；（6）適合于大樣本量的定量比較（大于24個(gè)樣本）。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：電噴霧質(zhì)譜：ESI-MS是利用高電場(chǎng)使質(zhì)譜進(jìn)樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電，在N2氣流的作用下，液滴溶劑蒸發(fā)，表面積縮小，表面電荷密度不斷增加，直至產(chǎn)生的庫(kù)侖力與液滴表面張力達(dá)到雷利極限，液滴爆裂為帶電的子液滴，這一過(guò)程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀，這時(shí)液滴表面的電場(chǎng)非常強(qiáng)大，使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進(jìn)入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子，一般說(shuō)來(lái)，肽段的混合物經(jīng)過(guò)液相色譜分離后，經(jīng)過(guò)偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析，給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時(shí)間一般較長(zhǎng)。目前，許多實(shí)驗(yàn)室兩種質(zhì)譜方法連用，獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列，設(shè)計(jì)探針或引物來(lái)獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入，又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn)，主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與重新組合。對(duì)人類(lèi)而言，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類(lèi)的健康。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記（label）和非標(biāo)記（labelfree）定量策略，標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)各種生命過(guò)程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記（labelfree）的定量蛋白組學(xué)技術(shù)，Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度，從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)并帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。河南定量蛋白組學(xué)分析方法

在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中，蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。廣東Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：等電聚焦：等電聚焦（isoelectricfocusing，IEF）是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離，等電聚焦中，蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸，在電場(chǎng)中形成正極為酸性，負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點(diǎn)的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場(chǎng)中移動(dòng)；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點(diǎn)位置時(shí)，其靜電荷數(shù)為零，在電場(chǎng)中不再移動(dòng)，據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。廣東Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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