武漢農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-24

GC-MS非靶向與代謝組學(xué)的關(guān)系?代謝組學(xué)是運(yùn)用多種技術(shù)手段,研究生物體系中小分子代謝物(包括氨基酸、糖和磷酸糖、生物胺和脂質(zhì)等)的種類(lèi)、數(shù)量及變化規(guī)律的科學(xué),是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。其中GC-MS非靶向代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)源性代謝物進(jìn)行系統(tǒng)全方面的分析平臺(tái)。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)因?yàn)槠漭^為成熟、分辨率高、靈敏度高、重現(xiàn)性好,擁有大量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)的特點(diǎn),被大量地運(yùn)用在植物、動(dòng)物、微生物的研究中。隨著信息科學(xué)和分析技術(shù)的發(fā)展,運(yùn)用GC-MS非靶向代謝組學(xué)研究疾病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)藥物靶點(diǎn)的方法日趨成熟,其重要性也日益凸顯。GC-MS非靶向代謝組學(xué)也在代謝性疾病等藥物靶點(diǎn)、疾病機(jī)制研究和藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)中提供重要參考和啟示。代謝組學(xué) (metabolomics)的出現(xiàn)是生命科學(xué)研究的必然。武漢農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)

LC-MS非靶向代謝組學(xué):LCMS非靶向是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用(LC–MS)方法檢測(cè)生物體受擾動(dòng)或刺激前后大量代謝產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化,從中找出表達(dá)差異的代謝物,進(jìn)而闡明生物體代謝相關(guān)過(guò)程的代謝組學(xué)技術(shù)。LCMS非靶向代謝組學(xué)適用于分析難揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的代謝產(chǎn)物,具有高通量、高分辨率、高靈敏度的特點(diǎn)。超高壓液相色譜或超高效液相色譜(UPLC)通過(guò)采用更小粒徑的色譜填料配合更高的壓力,實(shí)現(xiàn)了更好的分離,具體包括更高的分離能力、更快的分離速度以及更好的靈敏度;串聯(lián)質(zhì)譜儀在MS掃描模式下,可實(shí)現(xiàn)高低碰撞能量快速切換,同時(shí)采集代謝物的一二級(jí)質(zhì)譜信息,結(jié)合代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)質(zhì)譜信息的解析,在單次分析中可檢測(cè)和鑒定幾百至幾千種代謝物。武漢農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)代謝組學(xué)關(guān)注的對(duì)象是分子量在1000以下的小分子化合物。

代謝組學(xué)需要多少的生物學(xué)重復(fù)?生物學(xué)重復(fù)指的是相同處理的相同類(lèi)型的生物樣本的數(shù)量(如相同劑量給藥后2小時(shí)的小鼠采集并且相同儲(chǔ)存條件和處理方法血清樣本)。相較于基因和蛋白,代謝物處于生命活動(dòng)的下游,收到環(huán)境和遺傳背景等因素影響較大,生物學(xué)重復(fù)少可能會(huì)放大組內(nèi)差異對(duì)于整體差異的影響,進(jìn)而影響結(jié)果(如準(zhǔn)確和足夠多的找出生物標(biāo)志物)。因此根據(jù)不同的生物類(lèi)型,需要不同的生物學(xué)重復(fù)來(lái)增加數(shù)據(jù)的可靠性和說(shuō)服力。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類(lèi)似。

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?根據(jù)不同的檢測(cè)要求,需要配合不同的樣本量和樣本采集方法,常規(guī)的方法和單個(gè)樣本量如下:(1) 微生物和細(xì)胞樣本:細(xì)胞迅速猝滅細(xì)胞并冷凍保存;單個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量要求10^6。(2) 動(dòng)物體液(如尿、血、組織、唾液):采樣后要迅速預(yù)處理,如加入抗凝血?jiǎng)⒎栏瘎?,并立即冷凍處理?80 ℃);單個(gè)樣本要求體積為10μL。(3) 植物樣本:采集后迅速冷凍(液氮),然后轉(zhuǎn)入-80℃保存,單個(gè)樣本要求質(zhì)量為50mg。代謝組學(xué)與臨床化學(xué)較為相似。

如何獲得高質(zhì)量GC/MS代謝組學(xué)數(shù)據(jù)?實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)先不談,在儀器分析階段,若想獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù),有以下幾個(gè)方面需要注意。1)前處理方法的一致性。不同實(shí)驗(yàn)人員操作方式不盡相同。因此,一個(gè)項(xiàng)目應(yīng)當(dāng)只由一個(gè)人負(fù)責(zé)前處理。推薦使用自動(dòng)衍生設(shè)備,以減少人為的誤差。2)檢測(cè)之前需確保儀器處于比較好工作狀態(tài)。儀器的控制軟件都有系統(tǒng)自檢功能,可以快速便捷地核查質(zhì)譜儀器的狀態(tài)。但更重要的是氣相色譜狀態(tài),推薦使用一組混標(biāo)作為儀器質(zhì)控。在每一個(gè)項(xiàng)目開(kāi)始之前,先進(jìn)行質(zhì)控樣檢測(cè),確認(rèn)氣相色譜的分離度和質(zhì)譜的整體響應(yīng)。3)后期數(shù)據(jù)矯正,特別是對(duì)于大樣本項(xiàng)目。我們可以在檢測(cè)序列中加入隨行質(zhì)控樣本(每個(gè)樣品取少量后混合),在后期數(shù)據(jù)處理時(shí),使用質(zhì)控樣本結(jié)合如LOESS之類(lèi)的算法對(duì)整體數(shù)據(jù)進(jìn)行矯正。代謝組學(xué)的發(fā)展很迅速。哈爾濱靶向代謝組學(xué)定量分析

代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)后出現(xiàn)的新興“組學(xué)”。武漢農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)

代謝組學(xué)究竟是一門(mén)什么樣的研究方向?首先定義什么是代謝組學(xué)。簡(jiǎn)單的說(shuō)就是研究生物體對(duì)內(nèi)外刺激的整體代謝應(yīng)答規(guī)律。那么為什么代謝組學(xué)是基因組,轉(zhuǎn)錄組,蛋白質(zhì)組的下游。我們研究它到底有什么意義。中心法則告訴我們了遺傳信息的流向,的執(zhí)行者蛋白質(zhì)中很多酶參與了體內(nèi)的代謝過(guò)程?;驕y(cè)序數(shù)量太大,而且基因水平解釋問(wèn)題往往很吃力。因?yàn)榛虻恼{(diào)控和生物學(xué)事件之間隔了一個(gè)很漫長(zhǎng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。蛋白同理,一是蛋白種類(lèi)巨大,二是蛋白組學(xué)發(fā)展進(jìn)入瓶頸;發(fā)展代謝組是因?yàn)榇x物種類(lèi)只有不到1w種,建立它的差異分析更加簡(jiǎn)單,同時(shí)在價(jià)格等方面更有推廣的意義。武漢農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)

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