濟南定量N糖基化蛋白質(zhì)組學分析方法

定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)：定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)主要分為標記（label）和非標記（labelfree）定量策略，標記策略又分為體內(nèi)標記和體外標記兩種。細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。定量蛋白質(zhì)組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進行精確的定量和鑒定。非標記（labelfree）的定量蛋白組學技術(shù)，Labelfree定量蛋白組學技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內(nèi)部標準，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度，從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。蛋白質(zhì)組學的研究主要促進分子醫(yī)學的發(fā)展。濟南定量N糖基化蛋白質(zhì)組學分析方法

蛋白質(zhì)組學，指對某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì)及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究，以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括：組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術(shù)支撐，使得許多有實際應(yīng)用的蛋白質(zhì)組功能研究成為可能，包括翻譯后修飾的整體分析，蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的重建和模式生物蛋白表達譜的定量研究；在臨床醫(yī)學和轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究中也越來越多地應(yīng)用到蛋白質(zhì)組學技術(shù)。浙江Label free多肽組學質(zhì)譜鑒定在未來的發(fā)展中，蛋白質(zhì)組學的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?/p>

蛋白質(zhì)組學在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用？基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段，當前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學。隨著質(zhì)譜、系統(tǒng)生物學、生物信息學等相關(guān)學科的發(fā)展，我認為今后我們會更多地在現(xiàn)實生活中見到蛋白質(zhì)組學相關(guān)的應(yīng)用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變（鐮刀形紅細胞癥）、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計，應(yīng)該遠小于1%的ELISA測試量。由于成本和通量等原因，蛋白質(zhì)組學技術(shù)并不如ELISA適合大量的日常分析。但對于一些分析有問題的項目，采用基于質(zhì)譜（或二維膠等手段）的蛋白質(zhì)組學有獨特的技術(shù)優(yōu)勢。另外，蛋白質(zhì)組學方法開發(fā)和驗證周期短，在中高級特殊應(yīng)用（如極少使用的特殊蛋白指標臨床檢測、未知疾病研究和控制）中也有其獨特優(yōu)勢。

Labelfree非標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)特點：（1）不需要標記處理，操作簡單，成本低、實驗周期短；（2）每個樣品單獨處理、上機；（3）可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量，樣品類型不受限制；（4）對單個樣品的蛋白總量要求相對較低，對于組織本身蛋白量不高，可以選擇Label-Free，適用于一些難收集樣品；（5）定性沒有問題，但是定量的準確性較標記定量稍差，會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響；（6）適合于大樣本量的定量比較（大于24個樣本）。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組意指“一種基因組所表達的全套蛋白質(zhì)”，即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。

定量蛋白質(zhì)組學分析：特點：（1）不同樣本標記之后混樣，統(tǒng)一處理上機，減少了分別上機造成的實驗誤差，并利用同位素標簽的豐度來檢測，定量更準確，重復(fù)性更好；（2）由于需要標記試劑標記，因此成本相對較高；（3）通量高，在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品；（4）利用基于同一個參考樣品的辦法，可以進行多于8個樣品的定量比較；（5）iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學分析：Label-Free定量，即非標記的定量蛋白質(zhì)組學，不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化，通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。蛋白質(zhì)組學技術(shù)有飛行時間質(zhì)譜。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學方法

蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要。濟南定量N糖基化蛋白質(zhì)組學分析方法

定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹：iTRAQ：iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學應(yīng)用比較普遍的技術(shù)，該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標記和定量，將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標記)，從而簡化了定量的復(fù)雜性，然后通過多肽定量值回歸到蛋白的定量值，從而測定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。iTRAQ定量不依賴樣本，可檢測出較低豐度蛋白，胞漿蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等，且定量準確，可同時對8個樣本進行分析，并可同時得出鑒定和定量的結(jié)果，特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。濟南定量N糖基化蛋白質(zhì)組學分析方法

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