深圳定量蛋白組學應用

PRM靶向蛋白組學：PRM技術是一種根據(jù)已知實測信息或質譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為QExactive系列質譜儀，首先以四極桿作為質量過濾器，特異性地選擇與預先設定質荷比相同的肽段離子（母離子）通過，隨后在高能碰撞池中碎裂母離子，之后通過Orbitrap分析碎片離子（子離子）得到肽段的二級質譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性，并且有效的降低了背景噪音，去除了干擾離子，提高了靈敏度。在確保數(shù)據(jù)質量的前提下，為了在一次分析中檢測更多的蛋白質，可用預置PRM（ScheduledPRM,sPRM）的方法，這種方法需要知道每個肽段的保留時間信息，使得每個肽段只在其洗脫時間窗口內執(zhí)行PRM檢測，很大程度上提高了檢測效率，可同時檢測上百種蛋白質。PRM技術是目前應用較普遍的質譜蛋白質靶向定量技術。蛋白質組的概念指由一個基因組，或一個細胞、組織表達的所有蛋白質。深圳定量蛋白組學應用

蛋白質組學，指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究，以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網(wǎng)絡。研究的內容主要包括：組成蛋白質一級結構氨基酸的序列特征、蛋白質的豐度、蛋白質活性、蛋白質的修飾、亞細胞定位和三維結構、蛋白質之間的相互作用以及對蛋白質的高階復合物結構。質譜技術的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術支撐，使得許多有實際應用的蛋白質組功能研究成為可能，包括翻譯后修飾的整體分析，蛋白質相互作用網(wǎng)絡的重建和模式生物蛋白表達譜的定量研究；在臨床醫(yī)學和轉化醫(yī)學研究中也越來越多地應用到蛋白質組學技術。河南醫(yī)學蛋白質組學質譜鑒定蛋白質組（Proteome）一詞，源于蛋白質（protein）與基因組（genome）兩個詞的組合。

蛋白組學技術：質譜技術相較于傳統(tǒng)蛋白質鑒定技術而言，擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。質譜鑒定蛋白質的基本原理是先將樣品分子離子化，然后根據(jù)不同離子之間的質荷比差異來分離并確定蛋白質的相對分子質量。根據(jù)蛋白質酶解后所得到的肽質量指紋圖譜、肽序列標簽、和肽階梯序列去檢索蛋白質或核酸序列數(shù)據(jù)庫，質譜技術可達到對蛋白質的快速鑒定和高通量篩選。因產(chǎn)生離子的方法不同而發(fā)展起來的質譜包括基質輔助激光解吸離子化質譜、電噴霧離子化質譜、表面增強激光解吸離子化質譜等。

定量蛋白質組學技術：TMT定量蛋白組學技術：TMT(TandemMassTags)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術采用多個（2-10）穩(wěn)定同位素標簽，特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質譜分析，能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量，可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術是多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似，可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。蛋白質組學的研究主要促進分子醫(yī)學的發(fā)展。

蛋白組學樣本要求：常規(guī)組織：（心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等）PBS洗滌去除殘留血液和污染物，剔除無關的干擾組織（血管、脂肪、結締組織等）；沖洗干凈，用組織剪或手術刀將組織分離成1cm3左右的小塊；液氮速凍5min，保存于-80℃。軟骨組織：PBS洗滌去除殘留血液和污染物；用手術刀將軟骨切成1cm3左右的小塊；液氮速凍5min，保存于-80℃。軟體動物（吸蟲等）PBS洗滌去除來自宿主的污染；液氮速凍5min，保存于-80℃。蛋白質組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質基礎，也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。蛋白質組與基因組相對應，也是一個整體的概念。江蘇PRM靶向定量蛋白質組學一般流程

在當前的生物醫(yī)學研究和臨床診斷中，蛋白質組學相關技術有非常多的應用。深圳定量蛋白組學應用

蛋白質組學技術：等電聚焦：等電聚焦（isoelectricfocusing，IEF）是一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當?shù)鞍踪|遷移至其等電點位置時，其靜電荷數(shù)為零，在電場中不再移動，據(jù)此將蛋白質分離。深圳定量蛋白組學應用

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