浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)分析方法

來源: 發(fā)布時間:2021-12-26

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細(xì)胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細(xì)胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進(jìn)行定量研究,尋找差異表達(dá)的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標(biāo)志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標(biāo)。杭州琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析價格蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。

翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學(xué)水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細(xì)胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團(tuán)或通過蛋白質(zhì)水解去基團(tuán)而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。經(jīng)過翻譯后修飾的蛋白質(zhì)稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙?;⒎核鼗?、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略:常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化:泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記,泛素用親和標(biāo)簽(通常為6xHis)進(jìn)行標(biāo)記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu),經(jīng)胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質(zhì)量增加114,因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對樣品進(jìn)行預(yù)分離,使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有可靠性。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?可以使蛋白質(zhì)具有生物活性,可以發(fā)揮相應(yīng)的功能。翻譯是蛋白質(zhì)生物合成(基因表達(dá)中的一部分,基因表達(dá)還包括轉(zhuǎn)錄)過程中的第二步(轉(zhuǎn)錄為第1步),翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉(zhuǎn)錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應(yīng)的特定氨基酸序列的過程。但也有許多轉(zhuǎn)錄生成的RNA,如轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。哈爾濱蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)價格

蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):能夠特異鑒定單個磷酸化位點(diǎn)。浙江蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù)。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上,不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點(diǎn)。浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)分析方法

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