江蘇蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)一般流程

來源: 發(fā)布時間:2022-05-25

乙?;揎椀鞍捉M學(xué)簡介:乙?;前岩环N乙酰官能基團(tuán)添加到另一種有機化合物上,并進(jìn)行結(jié)合的過程。乙?;彩羌?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)翻譯后修飾的一種重要形式,其主要發(fā)生在組蛋白賴氨酸上,是由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶 (HATs) 催化的,其反過程去乙?;山M蛋白去乙酰酶 (Histone deacetylases,HDs 或者 HDACs) 催化的。關(guān)鍵組蛋白的 N-末端富含賴氨酸,生理條件下帶正電,按照組成可以分為 5 種,包括:關(guān)鍵組蛋白(core histone):H2A、H2B、H3、H4;連接組蛋白(linker histone):H1。組蛋白結(jié)構(gòu)高度保守,尤其是 H4。關(guān)鍵組蛋白由球形部和尾部構(gòu)成,球形部借 Arg 與磷酸二脂骨架間的靜電作用使 DNA 分子纏繞在組蛋白關(guān)鍵上,形成核小體,尾部含有大量 Arg 和 Lys,為轉(zhuǎn)譯后修飾的部位。H1 多樣性,具有屬和組織特異性。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義。江蘇蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)一般流程

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:盡管質(zhì)譜儀器的分析能力近年來有了長足的發(fā)展,但是由于蛋白翻譯后修飾化學(xué)計量值低、復(fù)雜性大,直接將蛋白組(如全細(xì)胞裂解產(chǎn)物,組織勻漿產(chǎn)物或全血清蛋白)的酶解肽段送入質(zhì)譜鑒定和定量PTM是非常困難的。因此,很多翻譯后修飾的富集方法會被采用,來提高樣品中PTM肽段的豐度和相對比例,從而提高了質(zhì)譜對翻譯后修飾位點的鑒定效率。研究發(fā)現(xiàn)在泛素化修飾的蛋白在tyrpsin的作用下都會產(chǎn)生diGly位點。基于這一特異性,利用針對蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)基序(motif)抗體,在肽段水平上免疫親和富集帶有泛素化修飾的肽段,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)行定量分析,能夠快速、準(zhǔn)確、高通量地分析多種疾病相關(guān)信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白修飾的變化,滿足創(chuàng)新性研究、生物標(biāo)志物鑒定、藥物靶點篩選和評價的需求。湖北蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)有哪些類型磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。

乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向:1、乙?;揎椗c細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙?;鸬拇x疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機理研究。乙?;飳W(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,育種保護(hù)研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機理研究等。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙酰化,脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。在技術(shù)上,研究翻譯后修飾蛋白的主要挑戰(zhàn)是開發(fā)特異性的檢測和純化方法。

琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好;通過高分辨率、高掃描速度的質(zhì)譜,對富集的琥珀?;亩芜M(jìn)行大規(guī)模鑒定;結(jié)合常用的定量技術(shù)可對不同樣品間的琥珀?;讲町愡M(jìn)行定量比較。適用范圍:藥物作用靶點研究;疾病標(biāo)志物篩選;植物脅迫/抗逆研究;作用機制研究;要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫、EST序列(轉(zhuǎn)錄組)或基因組注釋信息。應(yīng)用方向:線粒體代謝、生物合成與代謝、中心代謝途徑、炎癥與疾病。蛋白質(zhì)磷酸化修飾可應(yīng)用于食品工業(yè)方面。江蘇蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。江蘇蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點?蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段,并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫,確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。江蘇蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)一般流程