iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組介紹:iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組研究是對一個基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,利用標(biāo)記試劑中的二級報告離子來對蛋白進(jìn)行精確鑒定和定量。技術(shù)優(yōu)勢:1、適用范圍廣:可檢測到的蛋白除了胞漿蛋白外,還有線粒體蛋白、膜蛋白。也能對任何類型的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定,包括高分子量,酸性,堿性蛋白質(zhì);2、高通量:一次可以實(shí)現(xiàn)多個樣品的定性定量分析,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。修飾蛋白組學(xué)研究
蛋白質(zhì)組學(xué)介紹:蛋白質(zhì)組學(xué),指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)組主要通過蛋白質(zhì)雙向電泳、氨基酸序列測定、質(zhì)譜、生物信息等方法,研究某個基因組對應(yīng)的所有蛋白質(zhì)特征,包括蛋白質(zhì)含量、亞細(xì)胞定位、活性以及蛋白修飾等內(nèi)容。北京Label free多肽組學(xué)分析方法蛋白質(zhì)組研究技術(shù)覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。
蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:1.蛋白質(zhì)鑒定:能夠應(yīng)用一維電泳和二維電泳并分離相關(guān)的技術(shù),應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)停止審定研討。2.修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要閱歷后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。修飾是蛋白質(zhì)調(diào)理功用的重要方式,因而對蛋白質(zhì)后修飾的研討對說明蛋白質(zhì)的功用具有重要作用。3、蛋白質(zhì)功用:如剖析酶活性和酶底物,細(xì)胞因子的生物剖析/配基-受體分離剖析。能夠應(yīng)用基因敲除和反義技術(shù)剖析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功用。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研討也在水平上有助于蛋白質(zhì)功用的理解。
蛋白組究竟研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢。蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。蛋白質(zhì)組的研究能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段。什么樣本能做蛋白組學(xué)檢測?濟(jì)南TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法
蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存。修飾蛋白組學(xué)研究
蛋白質(zhì)組學(xué)定義:蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics),指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法主要有:蛋白質(zhì)雙向電泳、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)、質(zhì)譜、生物信息學(xué)。修飾蛋白組學(xué)研究