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PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)實驗原理:PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實測信息或質(zhì)譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行靶向定量的技術(shù)。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為Q Exactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過濾器,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。貴陽蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場使質(zhì)譜進(jìn)樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達(dá)到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進(jìn)入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,許多實驗室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與重新組合。四川新型修飾蛋白組學(xué)研究內(nèi)容蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略有什么?
非標(biāo)定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化,認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。
蛋白質(zhì)組學(xué)的介紹:蛋白組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。修飾蛋白組學(xué)(定量磷酸化修飾組學(xué)、定量糖基化修飾蛋白組學(xué)、定量乙酰化修飾蛋白組學(xué)和定量泛素化修飾蛋白組學(xué))。蛋白質(zhì)組研究為疾病的診斷、疫苗及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念指由一個基因組(genome),或一個細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)(Protein).蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉(zhuǎn)錄時,一個基因可以多種mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以許多形式進(jìn)行翻譯后的修飾.故一個蛋白質(zhì)組不是一個基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時可以超過基因組的數(shù)目.蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個領(lǐng)域的**否認(rèn)它是單純的方法學(xué),就像基因組學(xué)一樣,不是一個封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識體系,而是一個領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學(xué)集中于動態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對基因表達(dá)的蛋白質(zhì)水平進(jìn)行定量的測定,鑒定疾病、藥物對生命過程的影響,以及解釋基因表達(dá)調(diào)控的機制.作為一門科學(xué)。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等。貴州TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)價格
對人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康。貴陽蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容
DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)優(yōu)點:采集所有離子及碎片圖譜,重現(xiàn)性好?;谒槠x子定量,選擇性好,可媲美 SPM/MRM。循環(huán)時間固定,掃描點數(shù)均勻,定量準(zhǔn)確度高。高通量,能同時監(jiān)測所有目標(biāo)蛋白。PRM 靶向定量蛋白組:平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白、目標(biāo)肽段進(jìn)行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白/肽段進(jìn)行相對定量。技術(shù)優(yōu)點:不依賴抗體;特異性;結(jié)果準(zhǔn)確、可靠;高通量。修飾蛋白質(zhì)組學(xué):利用 LC-MS/MS 結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索的方法,在搜庫時設(shè)置修飾搜庫參數(shù),實現(xiàn)對目標(biāo)所有已知的修飾位點磷酸化、乙?;?、糖基化和泛素化進(jìn)行鑒定。貴陽蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容