蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略有什么?“自頂向下”策略并不依賴于蛋白酶的酶切,而是直接鑒定完整蛋白質(zhì),在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢(shì)??墒窃摬呗缘娜毕菔堑鞍踪|(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而鳥(niǎo)管法蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂;所以鳥(niǎo)管法蛋白質(zhì)組學(xué)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了比較普遍的應(yīng)用?!白灾邢蛳隆辈呗砸惨蕾囉诘鞍酌傅拿盖?,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。蛋白質(zhì)組研究不只可以實(shí)現(xiàn)與基因組的關(guān)聯(lián),揭示生命活動(dòng)的發(fā)生規(guī)律。廣州蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說(shuō)大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對(duì)含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙酰化等等,也包括對(duì)這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡(jiǎn)單地測(cè)試了酵母中mRNA和對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過(guò)平均后r值只為0.4。上海PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)在應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。
蛋白質(zhì)組學(xué):對(duì)人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康,主要指促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質(zhì),而很多藥物的靶分子也是蛋白質(zhì)。藥物也可以干預(yù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理研究中,了解人不同發(fā)育、生長(zhǎng)期和不同生理、病理?xiàng)l件下及不同細(xì)胞類型的基因表達(dá)的特點(diǎn)具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關(guān)的分子,進(jìn)一步為設(shè)計(jì)作用于特定靶分子的藥物奠定基礎(chǔ)。
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):應(yīng)用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達(dá)的蛋白組合。2.需要在較短時(shí)間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。3.需要檢測(cè)的樣品蛋白含量低。4.需要檢測(cè)相互作用蛋白。技術(shù)特點(diǎn):1.對(duì)質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時(shí)有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對(duì)樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實(shí)驗(yàn)周期短,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用低。4.不需要額外并且昂貴的標(biāo)記試劑,排除了標(biāo)記過(guò)程帶入實(shí)驗(yàn)誤差的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也不必考慮標(biāo)記效率的問(wèn)題。蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過(guò)系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾變化對(duì)疾病的影響。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)、研究前沿與熱點(diǎn),包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù)。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開(kāi)。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,細(xì)胞分化凋亡研究,致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究,療效監(jiān)測(cè),新藥開(kāi)發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來(lái)經(jīng)過(guò)多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法。蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。濟(jì)南定量乙?;鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)
DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)是高通量,能同時(shí)監(jiān)測(cè)所有目標(biāo)蛋白。廣州蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用
蛋白質(zhì)組學(xué)描述: 蛋白質(zhì)組(proteome):一種細(xì)胞、組織或生物體完整基因組所對(duì)應(yīng)的全套蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics):研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、變化、定位及相互作用規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)譜技術(shù): 蛋白質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)鑒定分析的主要支撐技術(shù),它通過(guò)測(cè)定樣品離子的質(zhì)荷比(m/z) 來(lái)進(jìn)行成分和結(jié)構(gòu)分析。高靈敏度,精確度;能同時(shí)提供樣品的精確分子量和結(jié)構(gòu)信息;既可用于定性分析,也可用于定量分析。標(biāo)記定量技術(shù)原理: 在一級(jí)質(zhì)譜圖中,任何一種iTRAQ/TMT試劑標(biāo)記不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比; 在二級(jí)質(zhì)譜圖中,報(bào)告離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比的峰,因此根據(jù)波峰的高度及面積,可以鑒定出蛋白質(zhì)和分析出同一蛋白質(zhì)不同處理的定量信息。廣州蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用