南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究：泛素化修飾蛋白組學(xué)是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度，然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對(duì)富集得到的泛素化肽段樣品進(jìn)行定量分析。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)對(duì)于蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

乙?；揎椀鞍捉M學(xué)實(shí)驗(yàn)流程：1）組織/細(xì)胞破碎，提取蛋白質(zhì)；2）蛋白酶解成多肽片段；3）對(duì)多肽片段進(jìn)行 iTRAQ 標(biāo)記；4）高效特異性乙?；贵w富集乙?；揎楇亩?；5）使用 LC-MS/MS 對(duì)富集的乙酰化肽段進(jìn)行序列分析；5）數(shù)據(jù)分析，比對(duì)不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町悾?duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。乙?；且粋€(gè)普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，不僅集中在對(duì)細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對(duì)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面，而且還影響參與細(xì)胞周期和新陳代謝、肌動(dòng)蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙酰化不僅存在于真核細(xì)胞中，而且越來(lái)越多的證據(jù)也表明乙?；瑯佑绊懺S多原核細(xì)胞的生理生化過(guò)程。深圳蛋白質(zhì)丙?；揎椊M學(xué)分析研究蛋白質(zhì)乙酰化修飾，顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團(tuán)。

泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證：原理： 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。首先對(duì)泛素化的蛋白進(jìn)行胰酶消化，在賴(lài)氨酸的修飾位點(diǎn)上會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)甘氨酸的殘基(K-GG)，利用對(duì)泛素化賴(lài)氨酸（K-GG）具有高親和力的基序抗體，特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段，結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。

乙?；揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向：1、乙酰化修飾與細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過(guò)程研究。2、乙?；鸬拇x疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙酰化生物學(xué)意義：1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用；2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk；3、調(diào)節(jié)酶活性；4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個(gè)研究方面，如：1、農(nóng)林領(lǐng)域：抗逆脅迫機(jī)制，生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制，育種保護(hù)研究等；2、 畜牧業(yè)：肉類(lèi)及乳品質(zhì)研究，致病機(jī)理研究等。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)：翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán)，可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義，異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化，因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有有效性。廣州蛋白質(zhì)棕櫚?；揎椊M學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹：蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過(guò)程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）通過(guò)給蛋白質(zhì)添加磷酸酯，乙酸酯，酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性，并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過(guò)程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化，糖基化，泛素化，亞硝基化，甲基化，乙?；|(zhì)化和蛋白水解。因此，PTM的特征（包括修飾類(lèi)別和修飾位點(diǎn)）在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究