哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)概念：蛋白質(zhì)組學(xué)（英語：proteomics，又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)），是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象，研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組（Proteome）一詞，源于蛋白質(zhì)（protein）與基因組（genome）兩個(gè)詞的組合，意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”，即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識(shí)。蛋白質(zhì)組學(xué)，指對(duì)某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白組究竟研究原因：首先，由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在，RNA的表達(dá)量與實(shí)際對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高，就簡(jiǎn)單地測(cè)試了酵母中mRNA和對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性，結(jié)果是，低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低，而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高，經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。蛋白組究竟研究的是什么呢？第1，蛋白質(zhì)定性，或者說大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中；第2，蛋白質(zhì)定量，也就是大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)的含量（包括一定含量與相對(duì)含量）；第3，蛋白質(zhì)翻譯后修飾，這些修飾主要包括磷酸化，泛素化，糖基化，乙?；鹊?，也包括對(duì)這些翻譯后修飾的定量研究。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾變化對(duì)疾病的影響。

iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)優(yōu)勢(shì)：1、結(jié)果可靠：基于高靈敏度和高分辨的串聯(lián)質(zhì)譜方法，定性與定量同步進(jìn)行，同時(shí)得出定性和定量結(jié)果，重復(fù)樣品間的蛋白表達(dá)量相關(guān)性高；2、靈敏度高：分級(jí)分離，降低樣品復(fù)雜度，相比凝膠電泳觀測(cè)到的蛋白變化在2倍以上，iTRAQ計(jì)算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間，可檢測(cè)低豐度蛋白；3、分離能力強(qiáng)：可分離出酸/堿性蛋白，小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等；4、自動(dòng)化程度高：液質(zhì)聯(lián)用，自動(dòng)化操作，分析速度快，分離效果好。

非標(biāo)定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。按照其原理主要分為兩種，第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法，發(fā)展比較早，已經(jīng)形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ)，各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ)，計(jì)算每個(gè)肽段的信號(hào)強(qiáng)度在LC-MS上的積分。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作。

蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)現(xiàn)已被普遍應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域，對(duì)理解細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、代謝、衰老與病變有著重要作用。尤其在疾病的研究中，蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾變化對(duì)疾病的影響，從而在分子層面對(duì)疾病進(jìn)行分型，以起到對(duì)個(gè)性化療理研究的積極推進(jìn)作用。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用是當(dāng)今迅猛發(fā)展的研究領(lǐng)域之一，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步和普遍應(yīng)用，基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的醫(yī)療有望在不久的將來應(yīng)用于大規(guī)模的臨床實(shí)踐中。蛋白質(zhì)組（Proteome）一詞，源于蛋白質(zhì)（protein）與基因組（genome）兩個(gè)詞的組合。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)（從分析化學(xué)角度來看），就是對(duì)蛋白質(zhì)的定性定量分析。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐，并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)、研究前沿與熱點(diǎn)，包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù)。雙向凝膠電泳：雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置，它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究，蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用，細(xì)胞分化凋亡研究，致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究，療效監(jiān)測(cè)，新藥開發(fā)，病癥研究，蛋白純度檢查，小量蛋白純化，新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經(jīng)過多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法