貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析

來源: 發(fā)布時間:2022-04-03

蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學修飾反應是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過基于其氨基酸殘基的化學反應獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴展20個標準氨基酸的化學組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學反應中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點的一些亞甲基上。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析

蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾自下而上分析策略:常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化:泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標蛋白賴氨酸殘基的氨基進行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標記,泛素用親和標簽(通常為6xHis)進行標記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu),經(jīng)胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質(zhì)量增加114,因此可作為泛素定位位點的質(zhì)量標記。用HPLC對樣品進行預分離,使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點。河南琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。

翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質(zhì)組學的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學:磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。北京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學方法

質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析

蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義?在哺乳動物細胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過磷酸化修飾,在脊椎動物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號通路進而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、逆境應激、疾病發(fā)生等多種生命過程,一直是生物學研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學分析

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