北京蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)一般流程

來源: 發(fā)布時間:2022-03-16

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類型:根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、?;姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質(zhì)通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復(fù)雜性。北京蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價結(jié)合。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。廣州蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學(xué)類型蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點:檢測特異性高。

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾原理:相較于沒有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白,翻譯后修飾蛋白會在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的質(zhì)譜分析過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析;通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的相對分子質(zhì)量信息。對于某一個特定的肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的,當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,因為磷酸根的分子量也是確定的,所以在質(zhì)譜檢測過程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,則可以假設(shè)這個肽段發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級或多級質(zhì)譜的譜圖進行二次確認即可實現(xiàn)翻譯后修飾類型鑒定及修飾位點分析等。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的研究策略:目前,有幾種分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾的策略,包括質(zhì)譜(MS)、Eastern blotting、放射性標(biāo)記和Western blotting。放射性標(biāo)記和Western blotting是比較傳統(tǒng)、特異性和相對定量的方法。該過程需要事先知道翻譯后修飾類型。局限性包括抗體的特異性和可用性。質(zhì)譜技術(shù)也常被用于翻譯后修飾分析,不受修飾類型和相關(guān)修飾位點的現(xiàn)有知識的限制。自下而上:自下而上的技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中使用的質(zhì)譜策略之一。在根據(jù)序列鑒定肽之前,需要使用蛋白酶消化蛋白質(zhì)。由于該技術(shù)不能保證在檢測過程中被檢測肽的完整性和穩(wěn)定性,因此無法獲得不同蛋白質(zhì)翻譯后修飾之間關(guān)系的信息,這意味著它無法檢測到某些修飾。因此,該方法不適用于分析組蛋白的組合翻譯后修飾。在細胞中,乙酰化修飾的反應(yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?可以使蛋白質(zhì)具有生物活性,可以發(fā)揮相應(yīng)的功能。翻譯是蛋白質(zhì)生物合成(基因表達中的一部分,基因表達還包括轉(zhuǎn)錄)過程中的第二步(轉(zhuǎn)錄為第1步),翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉(zhuǎn)錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應(yīng)的特定氨基酸序列的過程。但也有許多轉(zhuǎn)錄生成的RNA,如轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。南京蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)分析價格

蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。北京蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達水平的變化。然而,許多生命過程不只受蛋白質(zhì)的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個復(fù)雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對豐度低的特點,主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對其進行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。北京蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)一般流程

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