武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機(jī)制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?；?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時(shí)空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動(dòng)態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個(gè)氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對(duì)性地開發(fā)和設(shè)計(jì)抑制劑,用于疾病的診療。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義？武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)乙?；揎椂x：蛋白質(zhì)在細(xì)胞中經(jīng)過翻譯后，到被運(yùn)輸?shù)较鄳?yīng)的細(xì)胞器并且發(fā)生特定的生物學(xué)作用前會(huì)經(jīng)過很重要的一步加工，那就是蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性、定位或功能。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化，乙?；腔?，泛素化等。蛋白質(zhì)乙?；揎?，顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?；鶊F(tuán)。在細(xì)胞中，乙?；揎椀姆磻?yīng)由乙?；D(zhuǎn)移酶所催化，將乙酰輔酶A的乙?；D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。在早期的研究中，乙?；揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾，直到后來研究發(fā)現(xiàn)原核細(xì)胞中年也存在著蛋白質(zhì)乙酰化修飾。所以，乙?；揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。山東蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題？

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析自中而下分析策略：自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同，直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后，用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜（WCX-HILIC）與配備電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用，對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行，但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問題，需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過濾。自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對(duì)其進(jìn)行片段化，不需要蛋白質(zhì)水解消化。目前，有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法：離線和在線。前者用四維分離法，后者用WCX-HILIC。

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾原理：相較于沒有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白，翻譯后修飾蛋白會(huì)在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的質(zhì)譜分析過程中，蛋白會(huì)首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析；通過質(zhì)譜分析，得到的是一系列肽段的相對(duì)分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定的肽段而言，在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的，當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后，例如磷酸化修飾，因?yàn)榱姿岣姆肿恿恳彩谴_定的，所以在質(zhì)譜檢測(cè)過程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量，則可以假設(shè)這個(gè)肽段發(fā)生了磷酸化修飾，再通過二級(jí)或多級(jí)質(zhì)譜的譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)即可實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾類型鑒定及修飾位點(diǎn)分析等。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有可靠性。

蛋白翻譯后修飾檢測(cè)：由于PTMs在基礎(chǔ)生物學(xué)以及疾病發(fā)病機(jī)理中的重要性，因此非常需要對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)蛋白翻譯后修飾進(jìn)行研究時(shí)通常需要富集步驟，因?yàn)檫@些翻譯后修飾的蛋白質(zhì)相對(duì)含量較低。大多數(shù)PTMs的檢測(cè)方法與富集策略結(jié)合在一起開發(fā)，以提供比較好的機(jī)會(huì)來識(shí)別、驗(yàn)證和研究蛋白翻譯后修飾的功能。但是，在檢測(cè)已有特異性翻譯后修飾抗體的修飾蛋白質(zhì)時(shí)，可能不需要富集步驟。質(zhì)譜技術(shù)，通過測(cè)定肽段的分子量可以對(duì)該肽段的翻譯后修飾情況進(jìn)行檢測(cè)，并可以對(duì)翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性和定量分析。在細(xì)胞中，乙?；揎椀姆磻?yīng)由乙?；D(zhuǎn)移酶所催化，將乙酰輔酶A的乙?；D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。山東蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)分析

蛋白質(zhì)的翻譯后修飾調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低，則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?；鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚?；闹饕δ苁谴龠M(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì)，如豆蔻酰基。由于對(duì)S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰(zhàn)性，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂酰化肽?，F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂?；鞍滓约皩?duì)目標(biāo)修飾蛋白進(jìn)行捕獲。武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)

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