定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。山東醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢(qián)
蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。labelfree-非標(biāo)定量法分析技術(shù)方法:非標(biāo)定量法[Labelfree]是近年來(lái)重要的質(zhì)譜定量方法,通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度,分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化。蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)(LabelFree)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。四川PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)多少錢(qián)蛋白質(zhì)組學(xué)包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
蛋白質(zhì)組學(xué):質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過(guò)測(cè)定被測(cè)樣品離子的理化性質(zhì)來(lái)進(jìn)行分析,根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前,蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時(shí)間(retentiontime)、質(zhì)荷比(m/z)、離子強(qiáng)度(intensity)這三個(gè)維度對(duì)肽蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量,即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據(jù)離子的形狀和截面對(duì)離子進(jìn)行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號(hào)能夠被區(qū)分和識(shí)別出來(lái)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀,結(jié)合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復(fù)測(cè)量所有檢測(cè)離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進(jìn)行蛋白質(zhì)組定性和定量。
PRM靶向蛋白組學(xué):PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實(shí)測(cè)信息或質(zhì)譜檢測(cè)規(guī)律的假定信息對(duì)樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行靶向定量的技術(shù)。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為QExactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過(guò)濾器,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過(guò),隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過(guò)Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級(jí)質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過(guò)濾與Orbitrap高分辨率測(cè)量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的前提下,為了在一次分析中檢測(cè)更多的蛋白質(zhì),可用預(yù)置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,這種方法需要知道每個(gè)肽段的保留時(shí)間信息,使得每個(gè)肽段只在其洗脫時(shí)間窗口內(nèi)執(zhí)行PRM檢測(cè),很大程度上提高了檢測(cè)效率,可同時(shí)檢測(cè)上百種蛋白質(zhì)。PRM技術(shù)是目前應(yīng)用較普遍的質(zhì)譜蛋白質(zhì)靶向定量技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類(lèi)健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益。
蛋白質(zhì)組學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的?研究對(duì)象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達(dá)蛋白,理論上都可以應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應(yīng)用科學(xué)。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細(xì)來(lái)說(shuō),蛋白質(zhì)組學(xué)包含許多分支:非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(xué)(對(duì)生物體蛋白表達(dá)含量進(jìn)行測(cè)定),修飾蛋白質(zhì)組學(xué)(對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾進(jìn)行檢測(cè))及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機(jī)制解析)等。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,針對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)與定量。因此更能反應(yīng)出生物體生理?xiàng)l件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組的概念指由一個(gè)基因組,或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。哈爾濱定量乙?;鞍踪|(zhì)組學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要。山東醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢(qián)
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線(xiàn)性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場(chǎng)中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點(diǎn)的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場(chǎng)中移動(dòng);當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點(diǎn)位置時(shí),其靜電荷數(shù)為零,在電場(chǎng)中不再移動(dòng),據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。山東醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢(qián)
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