單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)：10×genomics技術(shù)：首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分組成：Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode，一個微珠是對應于一種Barcode，通過這400萬種Barcode，可以把凝膠微珠給區(qū)分開（通過barcode可以把cell分開）。UMI是一段隨機序列，也就是說每一個DNA分子，都有自己的UMI序列（一個微珠上有很多種UMI，通過UMI可以把RNA分子分開，并可以標記RNA分子的數(shù)量）。10個堿基長的UMI，有100萬種序列的變化（4^10=1,048,576），UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復還是duplication及區(qū)分是真實的SNP位點還是PCR產(chǎn)生的突變。通過10×genomics儀器將單個細胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起，形成油包水的小微滴。轉(zhuǎn)錄組學無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉(zhuǎn)錄組分析。北京全轉(zhuǎn)錄學組定量分析
轉(zhuǎn)錄組學，基因組學，蛋白質(zhì)組學的區(qū)別：蛋白組學針對的是全體蛋白，組要以2D-Gel和質(zhì)譜為主，分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似，將蛋白用特定的物料化學手段分解成小肽段，在通過質(zhì)量反推蛋白序列，之后進行搜索，標識已知未知的蛋白序列。轉(zhuǎn)錄組學研究的是某個時間點的mRNA總和，可以用芯片，也可以用測序。芯片是用已知的基因探針，測序則有可能發(fā)現(xiàn)新的mRNA?；蚪M學研究的主要是基因組DNA，使用方法目前以二代測序為主，將基因組拆成小片段后再用生物信息學算法進行迭代組裝。當然這只是第1步，隨后還有繁瑣的基因注釋等數(shù)據(jù)分析工作。北京全轉(zhuǎn)錄學組定量分析轉(zhuǎn)錄組學分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達水平的同時，還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本。
轉(zhuǎn)錄組學測序結(jié)果的影響因素？RNA的降解嚴重影響測序的質(zhì)量，RNA降解后，加入poly-A后無法捕獲純化mRNA，因此，隨機引物反轉(zhuǎn)錄無法得到全部的cDNA，導致測序結(jié)果出現(xiàn)明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會對測序信號產(chǎn)生干擾，影響測序結(jié)果的準確性；同時由于轉(zhuǎn)錄組中轉(zhuǎn)錄本的豐度不一致，實驗前需要對樣本進行均一化處理，否則高豐度的表達基因會掩蓋低豐度表達基因，導致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復序列。
全轉(zhuǎn)錄組測序：狹義的轉(zhuǎn)錄組默認只包含mRNA，但是廣義的轉(zhuǎn)錄組指的是細胞或組織中所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的匯合，其中包含mRNA和非編碼RNA（non-codingRNA,ncRNA）。非編碼RNA目前的研究多集中在具有調(diào)控功能的smallRNA（以miRNA為表示），長鏈非編碼RNA（longnon-codingRNA,lncRNA）和環(huán)狀RNA（circularRNA,circRNA）上，而這幾類ncRNA的調(diào)控對象都和mRNA有關(guān)。因此，全轉(zhuǎn)錄組即包含了ncRNAs和mRNA。全轉(zhuǎn)錄組測序即對以上四種ncRNA進行測序，并分析這四者之間復雜的相互作用關(guān)系。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學有著巨大的應用前景。
轉(zhuǎn)錄組分析是目前應用比較廣的高通量測序分析技術(shù)之一。常見設(shè)計是不同樣品之間比較，尋找差異基因、標志基因、協(xié)同變化基因、差異剪接和新轉(zhuǎn)錄本，并進行結(jié)果可視化、功能注釋和網(wǎng)絡分析等。轉(zhuǎn)錄組的測序分析也相對成熟，從RNA提取、構(gòu)建文庫、上機測序再到結(jié)果解析既可以自己完成，又可以在專業(yè)公司進行。概括來看轉(zhuǎn)錄組的分析流程比較簡單，序列比對-轉(zhuǎn)錄本拼接(可選)-表達定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個環(huán)節(jié)清晰流暢，可以作為剛開始接觸高通量測序?qū)W習比較合適的技術(shù)之一。轉(zhuǎn)錄組學可以準確地識別可變剪切和融合基因。北京全轉(zhuǎn)錄學組定量分析
轉(zhuǎn)錄組學靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本。北京全轉(zhuǎn)錄學組定量分析
轉(zhuǎn)錄組學為什么原核物種只能做有參轉(zhuǎn)錄組分析？由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區(qū)域、操縱子及多順反子，如果按照無參轉(zhuǎn)錄組分析策略進行組裝的話，難度較大，組裝結(jié)果存在較大風險。轉(zhuǎn)錄組學差異基因數(shù)目多少比較合理？不同的處理，不同的研究目標，差異基因的數(shù)目是不同的，從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個位數(shù)或者上萬，那么就需要和分析人員溝通一下，查一查是否有問題。轉(zhuǎn)錄組學差異基因太多，注釋信息太雜亂，怎么挑選目標基因？對不同的差異組合進行維恩圖分析，挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象；根據(jù)前人的文獻報道，挑選相關(guān)差異基因，不要局限在自己研究的物種上。北京全轉(zhuǎn)錄學組定量分析
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