RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué):也被稱為整個(gè)轉(zhuǎn)錄組鳥測序(wts)。RNA-seq包含三個(gè)步驟:測序文庫的建立,在特定平臺(tái)中測序和生物信息學(xué)分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術(shù)的新的轉(zhuǎn)錄分析方法。采用NGS技術(shù)對從感興趣的RNA樣本序列反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行測序。簡而言之,就是對剪切變體、轉(zhuǎn)錄后RNA編輯、內(nèi)含子表達(dá)水平和特定等位基因的表達(dá)情況進(jìn)行定性和定量分析。RNA-Seq原理:在對基因組測序和分析研究的同時(shí),復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組研究也普遍發(fā)展起來。利用高通量測序技術(shù)平臺(tái)分析轉(zhuǎn)錄組的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平情況,更能挖掘未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本信息,精確地識(shí)別RNA的選擇性剪切以及編碼序列的單核苷酸多態(tài)性(SPN),進(jìn)一步解析復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組信息。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具。深圳circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用
宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組概念:宏轉(zhuǎn)錄組測序是對某一特定時(shí)期、特定環(huán)境樣品中的全部微生物的RNA進(jìn)行高通量測序,直接獲得該環(huán)境中所有微生物轉(zhuǎn)錄組信息的一種測序技術(shù)的新應(yīng)用。宏轉(zhuǎn)錄組中不只包含有微生物的物種信息,還有微生物的基因表達(dá)信息。如果說宏基因組能告訴我們微生物群,那么宏轉(zhuǎn)錄組則能告訴我們這些微生物,這有助于挖掘微生物功能基因和探索微生物與環(huán)境、疾病、動(dòng)植物等關(guān)系的機(jī)制。宏轉(zhuǎn)錄組分析:從以G為單位的高通量測序數(shù)據(jù)中獲取研究所需的微生物種類、基因、通路等信息是進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組研究必須經(jīng)歷的一步?,F(xiàn)在網(wǎng)絡(luò)上分析組學(xué)數(shù)據(jù)的工具五花八門。能否從眾多組學(xué)工具中選擇出適合分析宏轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的軟件,能否搭建一套完整、快速、高效、靈敏、高精確的宏轉(zhuǎn)錄組分析pipline,直接關(guān)乎到后期數(shù)據(jù)分析的進(jìn)行。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本。
轉(zhuǎn)錄組學(xué):轉(zhuǎn)錄組學(xué)是研究特定的細(xì)胞、組織或個(gè)體在特定時(shí)間和狀態(tài)下所轉(zhuǎn)錄出所有RNA的學(xué)科,轉(zhuǎn)錄組測序是指利用高通量測序方法,研究特定的細(xì)胞、組織或個(gè)體在特定時(shí)間和狀態(tài)下所轉(zhuǎn)錄出的所有mRNA,用于揭示不同功能狀態(tài)下的基因表達(dá)、結(jié)構(gòu)的差異,闡明分子機(jī)制。應(yīng)用領(lǐng)域:醫(yī)學(xué)研究:疾病標(biāo)志物篩查、疾病的診斷和分型、疾病復(fù)發(fā)診斷、病因與病理機(jī)制探究、臨床療效評價(jià)、藥物毒理學(xué)評價(jià)。生命科學(xué)研究:非生物環(huán)境關(guān)系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應(yīng)用、代謝途徑及功能基因組研究、藥用植物研究中的應(yīng)用。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics),是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡而言之,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個(gè)活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。優(yōu)勢:高通量、更精確的數(shù)字信號(hào);在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測;分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平的同時(shí),還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本;準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切和融合基因。應(yīng)用方向:植物生長機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù);炎癥發(fā)生機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù);表達(dá)差異的研究;基因點(diǎn)突變及多態(tài)性檢測。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測。
RNA-Seq,是基于新一代測序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的RNA并進(jìn)行mRNA富集,然后反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行的新一代高通量測序,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行片段的拼接組裝,從而可得到一個(gè)個(gè)的轉(zhuǎn)錄本,進(jìn)而可以形成對該生物樣品當(dāng)前發(fā)育狀態(tài)的基因表達(dá)狀況的全局了解。不同階段或部位的生物樣品的RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達(dá)水平的變化,針對關(guān)鍵基因則可以進(jìn)行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組學(xué)無需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針。北京宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)有著巨大的應(yīng)用前景。深圳circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用
全轉(zhuǎn)錄組測序?yàn)槭裁葱枰獦?gòu)建兩個(gè)文庫?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個(gè)測序文庫,一個(gè)小RNA文庫和一個(gè)去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機(jī)測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達(dá)幾萬,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。深圳circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用
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