無血清培養(yǎng)基，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份，達到既能滿足動物細胞培養(yǎng)的要求，又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細胞貼壁生長，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉*細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2）促生長因子及***：針對不同細胞添加不同的生長因子。***也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質(zhì)，有些***是許多細胞必不可少的，如胰島素。3）酶**劑：培養(yǎng)貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶**劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。RPMI1640培養(yǎng)基在抗體生產(chǎn)和免疫研究中有重要作用。山西MEM a培養(yǎng)基進口
但其引入的尿素和**銨成分含量過高，這對多種植物生長不利；cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開了一種無硝酸培養(yǎng)基，獲得較好的培養(yǎng)效果，但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑；cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基，可提高植物組培成功率，但引入了易制爆試劑硝酸鈉，且其*適用于植物離體培養(yǎng)，不具有通用性。此外，現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基，包括ms、b5、n6以及其他公開的植物**培養(yǎng)基，它們被用于配制液體培養(yǎng)基時的ph值波動大，在用于植物水培時均需要調(diào)節(jié)ph，過程繁瑣，耗費時間。因此，急需一種既無硝酸銨、也不引入新的易制爆成分，并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當(dāng)或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下，去除了市場禁止流通的易制爆成分nh4no3，且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術(shù)問題。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基，其每1000ml培養(yǎng)基中含有：kno32662mg、。重慶MEM a培養(yǎng)基代理商無酚紅培養(yǎng)基在細胞實驗中減少了干擾因素。
微量元素在細胞內(nèi)通常以與有機物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細胞中參與氧的轉(zhuǎn)運；鈷是維生素B12的組成部分，參與葉酸的合成和脂肪酸的合成；鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細胞內(nèi)具有重要功能的酶，還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能；亞硒酸鈉中的硒，作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基，具有抗過氧化物能力，參與消除細胞內(nèi)的脂肪酸過氧化物，提高細胞的生長速率和活性。在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中，為滿足細胞生長增殖需要，常常添加一些成份：蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用，動物細胞對許多物質(zhì)（難溶于水的離子或脂類物質(zhì)）的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用，如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進細胞生長。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白，能夠結(jié)合鐵，促進細胞對鐵離子的吸收，并具有***作用，其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關(guān)。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中，主要用來刺激細胞增殖，并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物，是腦磷酸的合成前提。
體外培養(yǎng)時，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來為細胞提供能量。（氨基酸）氨基酸在細胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：①是蛋白質(zhì)的基本組成單位，用于合成蛋白質(zhì)和多肽；②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③某些氨基酸還具有獨特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細胞內(nèi)氨的運輸?shù)龋虎芸赊D(zhuǎn)變成糖類和脂肪，參與氧化供能。細胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。不同的細胞對氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細胞不能自身合成的，必須依靠外源的細胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸，細胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來，但是在細胞培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的非必需氨基酸可以減輕細胞在合成方面的負擔(dān)，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細胞對谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細胞的主要氮源，且可作為細胞生長的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時，細胞會生長不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用。使用減血清培養(yǎng)基減少了實驗中血清帶來的變異性。
因為解凍時可能會有營養(yǎng)成份析出，影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2~8℃避光保存，使用前從冰箱取出，放入室溫進行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個月到12個月。液體細胞培養(yǎng)基盡量避免長期貯存，其中的谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解，如果細胞生長不良，可考慮檢測培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細胞培養(yǎng)基有具體的有效期，對于使用干粉細胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后，也應(yīng)低溫（2~8℃）貯存。除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外，培養(yǎng)基中的其他成份隨著溫度的升高也可能會發(fā)生降解或是析出。5.細胞培養(yǎng)基使用過程中常見問題分析由于大多數(shù)細胞適宜的pH為，偏離此范圍可能對細胞生長產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)的細胞一般對pH變動耐受力差，無限細胞系耐受力強。因此，原代培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng)，但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基確保了細胞的純凈生長環(huán)境。山西F12培養(yǎng)基進口
無血清培養(yǎng)基有助于細胞在無血清環(huán)境中的生長。山西MEM a培養(yǎng)基進口
參與細胞的代謝活動。此外，通過提供鈉，K+和Ca2+，幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。Na+是細胞外液中**主要的陽離子，對維持滲透壓的恒定有決定性的作用，還與Cl－共同參與生物電活動、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細胞內(nèi)液，對于***某些酶是必需的，并在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基質(zhì)所需陰離子，同時是細胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對于細胞的生長、代謝和調(diào)控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存儲和利用的不可或缺的化合物。上述離子對于細胞的作用各有不同，它們共同構(gòu)成了細胞賴以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境，細胞對于某種元素的吸收利用會受到其它元素的干擾，例如培養(yǎng)基中過高的鈣離子濃度會使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此，在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外，還需保證上述離子之間種類和比例的平衡。此外，微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對于細胞生長代謝和產(chǎn)物合成都有促進作用。山西MEM a培養(yǎng)基進口
