從而使培養(yǎng)基的預(yù)熱、加熱**及冷卻過程可在同一設(shè)備內(nèi)完成。該流程的加熱和冷卻時間比噴射加熱連續(xù)**流程要長些,但由于在培養(yǎng)基的預(yù)熱過程同時也起到了**后培養(yǎng)基的冷卻,因而節(jié)約了蒸汽和冷卻水的用量。(2)蒸汽直接噴射型的連續(xù)**系統(tǒng)流程中采用了蒸汽噴射器,它使培養(yǎng)液與高溫蒸汽直接接觸,從而在短時間內(nèi)可將培養(yǎng)液急速升溫至預(yù)定的**溫度然后在該溫度下維持一段時間**,**后的培養(yǎng)基通過一膨脹閥進(jìn)入真空冷卻器急速冷卻,從圖中可以看出,由于該流程中培養(yǎng)基受熱時間短,營養(yǎng)物質(zhì)的損失也就不很嚴(yán)重,同時該流程保證了培養(yǎng)基物料**先出,避免了過熱或**不徹底等現(xiàn)象。(3)由連消塔、維持罐和噴淋冷卻組成的**系統(tǒng)連續(xù)**的基本設(shè)備一般包括:①配料預(yù)熱罐,將配制好的料液預(yù)熱到60-70℃,以避免連續(xù)**時由于料液與蒸汽溫度過大而產(chǎn)生水汽撞擊聲;②連消塔,連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和,并使料液的溫度很快升高到**溫度(126-132)℃;③維持罐,連消塔加熱的時間很短,光靠這段時間的**是不夠的,維持罐的作用是使料液在**溫度下保持5-7min,以達(dá)到**的目的;④冷卻管,從維持罐出來的料液要經(jīng)過冷卻排管進(jìn)行冷卻。MEM培養(yǎng)基含有多種必需氨基酸和維生素,適合細(xì)胞培養(yǎng)。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基是什么
留點(diǎn)溫度計標(biāo)化合格后方可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的**柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點(diǎn)溫度計的溫差應(yīng)存l℃之間,則說明**器內(nèi)的溫度分布是均勻的。**后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入**后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時,觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,**仍可在培養(yǎng)基中生長,分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)**的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。化學(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣**時,由淡黃色變?yōu)楹谏。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷**效果是否達(dá)到要求;瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色,影響**效果的觀測。高壓蒸氣**必須使蒸氣順利進(jìn)入**器內(nèi),與**物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到**的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復(fù)三次,共做六次。5個點(diǎn)六次試驗表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣**效果合格。高壓**器屬于強(qiáng)檢儀器,但強(qiáng)檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。無血清培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)無血清培養(yǎng)基為細(xì)胞提供了無血清的純凈環(huán)境。
參與細(xì)胞的代謝活動。此外,通過提供鈉,K+和Ca2+,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。Na+是細(xì)胞外液中**主要的陽離子,對維持滲透壓的恒定有決定性的作用,還與Cl-共同參與生物電活動、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,對于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43-、SO42-、HCO3-是基質(zhì)所需陰離子,同時是細(xì)胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對于細(xì)胞的生長、代謝和調(diào)控都有重要的作用,含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞的主要成分,ATP、ADP是能量生成、存儲和利用的不可或缺的化合物。上述離子對于細(xì)胞的作用各有不同,它們共同構(gòu)成了細(xì)胞賴以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境,細(xì)胞對于某種元素的吸收利用會受到其它元素的干擾,例如培養(yǎng)基中過高的鈣離子濃度會使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此,在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外,還需保證上述離子之間種類和比例的平衡。此外,微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對于細(xì)胞生長代謝和產(chǎn)物合成都有促進(jìn)作用。
這里介紹熱力消毒**法。高熱破壞微生物蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,從而導(dǎo)致微生物死亡。受高熱作用后,蛋白質(zhì)分子運(yùn)動加快,肽鏈連接鍵斷裂,蛋白變性凝固;細(xì)胞膜功能受損使胞內(nèi)物質(zhì)漏出,**內(nèi)外環(huán)境平衡失調(diào)。不同種類微生物對熱的耐受力不同,多數(shù)無芽胞**經(jīng)55-60℃作用30-60分鐘后死亡,100℃時迅速死亡。有芽胞**則對高溫有強(qiáng)的抵抗力,如肉毒芽胞梭菌煮沸需3一5小時才死亡。熱力**分干熱**法和濕熱**法兩大類,相同溫度下后者較前告效力大,其原因是:①濕熱環(huán)境中菌體蛋白易凝固;②濕熱穿透力比干熱大;③濕熱蒸氣變?yōu)橐簯B(tài)時可釋放潛熱,迅速提高被**物體的溫度。1.干熱(dryheat)**法(1)焚燒。直接點(diǎn)燃或在焚燒爐內(nèi)進(jìn)行,*適用于廢棄物品或動物尸體。(2)燒灼。直接以火焰**,適用于微生物學(xué)實驗室接種環(huán)、針和試管口等**。(3)干烤。在干烤箱內(nèi)進(jìn)行,加熱至150-180℃2-4小時達(dá)到**效果,適用于高溫下不變質(zhì)、不被破壞和不蒸發(fā)的物品,如玻璃器皿、瓷器,不能用于塑料、棉、紙制品。2.濕熱(moistheat)消毒**法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐熱成分的方法。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞實驗中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。
所以做過強(qiáng)檢的**器還必須進(jìn)行**效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提**器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但**物品的實際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致**物品不徹底,影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基**不徹底,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣**器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。(三)**時的注意事項使用高壓蒸氣**器時,首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時,排除**器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,才可關(guān)閉排氣孔。假如**器內(nèi)仍存留有部分空氣時,剛壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值,但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多,剛二者相差也越大。差也越大,器內(nèi)溫度不足,**則不徹底。表蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)密度(kg/cm2)溫度(℃)1126表高壓蒸汽**器中溫度與冷空氣排出量的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)所達(dá)溫度。無血清培養(yǎng)基適合于需要無血清環(huán)境的細(xì)胞系。貴州Ham's F12培養(yǎng)基哪家便宜
無酚紅培養(yǎng)基在實驗中減少了潛在毒性。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基是什么
將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導(dǎo)實驗;b、**消毒:于無菌環(huán)境下,將挑選的種子置于無菌三角瓶中,用無菌水清洗3-5次,75%酒精搖動清洗5min,無菌水清洗3-5次,5%naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),清水洗3-5次,種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基:cs基本培養(yǎng)基+,用超純水溶解,。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導(dǎo)方法:用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)基,胚貼于培養(yǎng)基表面;于溫度24-26℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時,經(jīng)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。對比培養(yǎng)例7:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例7,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時,經(jīng)ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基是什么