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蛋白純化試劑-分子生物學(xué)酶-Hifi-taqDNApolymerase是從克隆有α－型高保真DNA聚合酶的大腸桿菌中分離純化所得，具有3'→5'以及5'→3'外切酶活性，保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。延伸速率在推薦的條件下大于每分鐘2kb。PCR產(chǎn)物為平端，可以直接接入Blunt平端連接載體中。應(yīng)用于高保真、快速擴(kuò)增目標(biāo)DNA，環(huán)拉法引入點(diǎn)突變，補(bǔ)平DNA粘性末端等。保存：-20℃存放儲(chǔ)存液：50mMTris-HCl(pH8.4)，50mMKCl，1mMDTT，0.1mMEDTA，0.1%tritonX-100,50%(v/v)glycerol。一步純化鏈霉親和素。江蘇多肽試劑銷售價(jià)格

蛋白純化試劑純化流程5)依次使用3倍柱體積的平衡液和5倍柱體積的去離子水平衡填料，***再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4-30°C保存，防止填料被細(xì)菌污染。2.4SDS-PAGE檢測(cè)將使用純化產(chǎn)品得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE檢測(cè)純化效果。3.在位清洗當(dāng)填料使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)反壓過(guò)高或者填料上面出現(xiàn)明顯的污染時(shí)，需要進(jìn)行在位清洗操作（Cleaning-in-Place，CIP）。建議按照下面操作去除填料上殘留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。去除強(qiáng)疏水結(jié)合的蛋白，脂蛋白和脂類通過(guò)使用30%異丙醇清洗5-10個(gè)柱體積，接觸時(shí)間為15-20分鐘可以去除此類污染物。然后，再使用10倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液，清洗填料2倍柱體積。例如，含有0.1–0.5%非離子去污劑的0.1M醋酸溶液，接觸時(shí)間為1–2小時(shí)。去污劑處理后，需要使用70%的乙醇清洗5個(gè)柱體積，以徹底去除去污劑。***使用10倍柱體積的去離子水清洗。河南天地人和試劑純化流程6X組氨酸標(biāo)記（His-tag）蛋白純化試劑說(shuō)明。

蛋白純化試劑，rProteinA/GBeads4FF加抗體純化流程3)再向其中加入1ml終止液，懸浮填料，終止交聯(lián)反應(yīng)，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，約15min后，800rpm離心1min，再吸棄上清。4)加入0.5ml的洗雜液，懸浮填料，進(jìn)行清洗，800rpm離心1min，吸棄上清。再重復(fù)兩次。2.4.3抗原沉淀反應(yīng)1)抗原吸附：加入含有抗原的樣品，用移液器輕輕吹打使抗原與填料-抗體復(fù)合物均勻分散。在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管10min，使抗原與抗體充分結(jié)合，如結(jié)合力較弱則可在室溫下反應(yīng)1h或者在4℃下反應(yīng)過(guò)夜。2)洗雜：將上述完成抗原吸附的填料-抗體-抗原復(fù)合物進(jìn)行離心，800rpm離心1min，收集上清液，置于冰上以備后續(xù)檢測(cè)。向離心管中加入1ml洗雜液，用移液器輕輕吹打使填料-抗體-抗原復(fù)合物均勻分散，然后進(jìn)行離心分離，800rpm離心1min，棄上清液。再重復(fù)洗滌兩次。***加入1ml洗雜液，用移液器將填料-抗體-抗原復(fù)合物懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中，并進(jìn)行離心分離，800rpm離心1min，棄上清液

試劑篇：2，細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去。如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分，如細(xì)胞核、染色體、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等，則可利用差速離心的方法將它們分開，收集該細(xì)胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚，然后用適當(dāng)介質(zhì)提取。粗分離當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液（有時(shí)還雜有核酸、多糖之類）獲得后，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開來(lái)。一般這一步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過(guò)濾、凝膠過(guò)濾、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。中壓預(yù)裝柱HiPur系列HiSelect Ni 6FF。

蛋白純化試劑NiSmartBeads是一種新型IMAC填料，螯合有非常牢固的Ni離子，具體性能見(jiàn)表1。NiSmartBeads主要應(yīng)用于分泌到真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸標(biāo)記蛋白的捕獲和純化，可以在含有EDTA及DTT的情況下進(jìn)行目的蛋白高效的純化。NiSmartBeads有很強(qiáng)的組分兼容性，適用于***底物及鹽濃度的緩沖條件2.純化流程2.1緩沖液的準(zhǔn)備可使用下列推薦緩沖液，也可根據(jù)自己的使用習(xí)慣配置不同的緩沖液體系，基本原理就是低咪唑上樣，高咪唑洗脫，或者高pH上樣，低pH洗脫。緩沖液在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過(guò)濾除菌。常規(guī)陽(yáng)離子交換介質(zhì)推薦 SP Beads 6FF。江蘇蛋白檢測(cè)試劑純化流程

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