現(xiàn)行《中國藥典》的qPCR檢測法中,針對不同的疫苗,其宿主DNA殘留量有不同的要求,比如基于vero細(xì)胞的狂犬疫苗,DNA殘留含量要求不高于3ng/劑,基于vero細(xì)胞的脊髓灰質(zhì)炎疫苗,DNA殘留量不高于50pg/劑,基于CHO細(xì)胞的乙肝疫苗,DNA殘留量不高于10pg/劑。因此,宿主細(xì)胞殘留DNA間測對于試劑和儀器的檢測靈敏度都提出了極高的要求。而要準(zhǔn)確檢測出宿主DNA殘留量,則需要采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的覺對定量方法,根據(jù)《中國藥典2020》對殘留DNA檢測方法的要求,其標(biāo)準(zhǔn)曲線要求R2≥0.98,斜率在-3.1到-3.8范圍內(nèi),每組加標(biāo)樣品回收率在50%-150%之間,RSD≤30%。哪些公司的HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒好?寧波Vero細(xì)胞殘留DNA檢測操作流程
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測在動物源性生物材料領(lǐng)域的應(yīng)用及要求:參考YY/T0606.25-2014《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品第25部分:動物源性生物材料DNA殘留量測定法:熒光染色法》中的要求,動物源性基質(zhì)材料的脫細(xì)胞過程被認(rèn)為是非常重要的,殘留DNA定量檢測是評價脫細(xì)胞過程及控制產(chǎn)品質(zhì)量的重要措施之一。但需要留意的是在去細(xì)胞化的過程中引入的添加物如:化學(xué)試劑、核酸酶、蛋白酶等會影響產(chǎn)品蕞終質(zhì)量,也應(yīng)當(dāng)引起重視。用qPCR進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時,哪些因素會對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響?前處理過程雜質(zhì)干擾的去除對qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測結(jié)果有著較大影響。樣品的前處理操作步驟對DNA檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度影響較大,通常采用加樣回收試驗來進(jìn)行驗證并確定可接受的偏離限度,內(nèi)標(biāo)回收率在50-150%的范圍內(nèi)都可以接受。樣品提取步驟較為復(fù)雜,需要特別注意,操作不當(dāng)不但可能影響回收率還可能引入環(huán)境污染。廣州畢赤酵母殘留DNA檢測美國FDA對HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求。
英國藥典(BP)對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定《英國藥典》(BP2017)通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑量,但對個別疫苗的殘留DNA限定標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格,如甲型肝炎滅活疫苗中的殘留DNA不得超過100pg/劑量,乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過10pg/劑量。印度藥典(PLIM)對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定《印度藥典》(IP2014)通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑量,但對個別疫苗的殘留DNA限定標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格,如甲型肝炎滅活疫苗中的殘留DNA不得超過100pg/劑量,乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過10pg/劑量。南京正揚CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理:試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量,通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化,可即時反映特異性擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。在反應(yīng)過程中所釋放的熒光強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時,體系的PCR循環(huán)數(shù)(Ct值)與該體系所含的起始DNA模板量的對數(shù)值呈線性關(guān)系。采用已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品,依據(jù)以上關(guān)系,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,對特定模板進(jìn)行定量分析,測定供試品中的外源DNA殘留量。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測:《美國藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的推薦方法;《中國藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。然而,熒光染色法/免疫閾值法這兩種非序列特異性檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)過程污染、檢測造成的假陽性污染還是工藝缺陷引起的DNA殘余,難以避免檢測值虛假偏高的情況,存在檢測局限性。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有哪些?
CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生物制藥行業(yè)中的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測。其主要用途包括:①生物制品質(zhì)量控制:通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA的存在和數(shù)量,可以評估生物制品的質(zhì)量和純度,確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)要求。②安全性評估:CHO細(xì)胞殘留DNA可能攜帶病毒、細(xì)菌或其他有害基因,對患者造成潛在風(fēng)險。通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA,可以評估生物制品的安全性,保障患者的用藥安全。③工藝監(jiān)測:CHO細(xì)胞殘留DNA的檢測可以監(jiān)測生產(chǎn)過程中的污染情況,及時采取措施避免CHO細(xì)胞殘留DNA的污染,保證生產(chǎn)過程的可控性和穩(wěn)定性。CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。廣州畢赤酵母殘留DNA檢測
哪些公司有Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒?寧波Vero細(xì)胞殘留DNA檢測操作流程
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA,檢測試劑盒具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。試劑盒配套有CHODNA定量參考品,已溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法,通則〈3407〉。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的E.coli宿主DNA,產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。試劑盒配套有E.coliDNA定量參考品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法,通則〈3407〉。寧波Vero細(xì)胞殘留DNA檢測操作流程