磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,具有其它傳統(tǒng)核酸提取方法不可比擬的優(yōu)勢(shì):(1)樣本需求量低:微量的生物樣本即可提到高濃度的核酸;(2)保護(hù)操作人員:全自動(dòng)核酸提取蕞大限度的減少操作人員與檢測(cè)的接觸,有效保護(hù)實(shí)驗(yàn)操作人員;(3)安全無(wú)毒無(wú)害:試劑不含酚、氯仿等有毒化學(xué)試劑,完全符合現(xiàn)代化環(huán)保理念。(4)磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度高,可直接用于PCR,回收率高(80%-120%)。HEK293細(xì)胞殘留核酸提取。南京RCL核酸提取操作流程
磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細(xì)胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來(lái)。此時(shí)經(jīng)過(guò)表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進(jìn)行“特異性結(jié)合”,形成“核酸-磁珠復(fù)合物”。然后在外加磁場(chǎng)的作用下,復(fù)合物即分離出來(lái)。蕞后經(jīng)過(guò)洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質(zhì)。磁珠法核酸提取即可通過(guò)手工提取也可通過(guò)自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)進(jìn)行提取。合肥病毒核酸提取價(jià)格支原體檢測(cè)時(shí),為什么要做核酸提?。?/p>
CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)中,磁珠法核酸提取回收率偏低的原因有哪些?樣品問(wèn)題:樣品存在抑制;操作原因:①洗滌液配制操作,外加有機(jī)溶劑的體積或純度不正確;②漏加或少加試劑組分;③磁珠保存不當(dāng),冷凍過(guò);④在提取過(guò)程中將樣品管高速離心或長(zhǎng)時(shí)間離心;⑤磁力架不匹配,磁性較弱;自動(dòng)化核酸提取設(shè)備原因:①自動(dòng)化核酸提取設(shè)備的磁分離方式設(shè)計(jì)有問(wèn)題、設(shè)備的磁場(chǎng)弱;②使用自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行核酸提取時(shí)所用的參數(shù)設(shè)置不合適;其他原因:①耗材非低吸附耗材;②耗材中有抑制物;③實(shí)驗(yàn)室存在抑制物;
磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫裂解:核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來(lái),細(xì)胞裂解可通過(guò)機(jī)械作用、化學(xué)作用、酶作用等方法實(shí)現(xiàn)。其中,酶作用主要是通過(guò)加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈霉蛋白酶)以使細(xì)胞破裂,核酸釋放。蛋白酶還能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì),促進(jìn)核酸的分離。結(jié)合:磁珠表面帶負(fù)電荷,磁珠buffer是高鹽環(huán)境有帶正電荷的鹽離子,樣本被buffer影響,磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷。宿主細(xì)胞殘留核酸提取時(shí),回收率偏低的原因有哪些?
磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,具有其它傳統(tǒng)核酸提取方法不可比擬的優(yōu)勢(shì):(1)用時(shí)少,操作簡(jiǎn)單快速:整個(gè)操作流程基本分為五步(裂解、結(jié)合、洗滌、干燥、洗脫),全程無(wú)需離心操作;(2)質(zhì)量穩(wěn)定可靠:游離的磁珠與核酸的結(jié)合量更大,特異性的結(jié)合使得核酸純度更高,且可通過(guò)控制磁珠表面基團(tuán)來(lái)調(diào)節(jié)核酸回收量;(3)全自動(dòng)化操作:生物磁珠通過(guò)儀器可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作,可實(shí)現(xiàn)幾十甚至幾百個(gè)樣品的提取,極大提高了檢測(cè)效率;支原體核酸提取過(guò)程中有哪些注意事項(xiàng)?廣州支原體DNA提取試劑盒
宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒的價(jià)格。南京RCL核酸提取操作流程
磁珠法核酸提取產(chǎn)品,磁珠如何與核酸結(jié)合實(shí)現(xiàn)提取功能?核酸作為一種生物大分子,之所以能夠在水溶液中穩(wěn)定分散不沉淀,是由于三種非共價(jià)作用力的存在:(1)靜電相互作用(2)范德華力(3)氫鍵。核酸分子具有多個(gè)磷酸基團(tuán),呈現(xiàn)高度負(fù)電性,分子間互相排斥從而避免發(fā)生團(tuán)聚。此外,核酸分子在水溶液中通過(guò)氫鍵與范德華力結(jié)合了大量的水分子在其周圍,形成一個(gè)水化層,也阻止了分子間的聚集。因此,要使得核酸分子結(jié)合到磁珠表面,就必須削弱上述作用力,屏蔽溶液中的靜電斥力,同時(shí)破壞核酸分子表面的水化層,使其能夠與磁珠表面相接觸,進(jìn)而產(chǎn)生吸附。南京RCL核酸提取操作流程