磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--樣品取用越多,提取效果越好在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下,往往核酸提取效果不好,很多老師就會(huì)采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡(jiǎn)單地增加樣本取樣量,有時(shí)會(huì)引入過多的雜質(zhì),超出裂解液裂解能力,也會(huì)使提取效率降低,所以并不推薦通過簡(jiǎn)單的增加樣本取樣量的方式來達(dá)到增加提取量的目的。如果確實(shí)是由于樣本量不足而引起的提取量過低,建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取?;蛘咴黾恿呀獾耐耆?,使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。南京正揚(yáng)宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒的裝量是多少?合肥宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程
磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細(xì)胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時(shí)經(jīng)過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進(jìn)行“特異性結(jié)合”,形成“核酸-磁珠復(fù)合物”。然后在外加磁場(chǎng)的作用下,復(fù)合物即分離出來。蕞后經(jīng)過洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質(zhì)。磁珠法核酸提取即可通過手工提取也可通過自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)進(jìn)行提取。蘇州支原體DNA提取特點(diǎn)宿主細(xì)胞核酸提取能用于支原體提取嗎?
磁珠法核酸提取,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),主要體現(xiàn)在:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、大批量操作,目前已有96孔的核酸自動(dòng)提取儀,用一個(gè)樣品的提取時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)對(duì)96個(gè)樣品的處理,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳染性疾病爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速及時(shí)的應(yīng)對(duì),這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及;②操作簡(jiǎn)單、用時(shí)短,整個(gè)提取流程只有四步,大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成;③安全無(wú)毒,不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減少到蕞少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;④磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度高。
南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細(xì)胞DNA/RNA,產(chǎn)品裝量為100reaction/盒,試劑組分包括樣品稀釋液、裂解液1、裂解結(jié)合液、磁珠懸浮液、洗滌液A、洗滌液B、洗脫液,裂解液1需放置于2-8℃儲(chǔ)存,其余組分均常溫儲(chǔ)存即可,切勿冷藏或冷凍。試劑盒有效期為12個(gè)月。在使用時(shí),需自備金屬浴/水浴鍋、渦旋混勻器、掌上離心機(jī)、高速離心機(jī)等設(shè)備。
南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細(xì)胞DNA/RNA,產(chǎn)品使用事項(xiàng)包括以下幾點(diǎn):1.磁珠懸浮液嚴(yán)禁冷凍和離心,以免損傷磁珠,磁珠使用前務(wù)必充分混勻。2.裂解液結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B在低于10℃時(shí)可能出現(xiàn)白色結(jié)晶,若出現(xiàn)沉淀,請(qǐng)37℃水浴重新溶解后使用。3.請(qǐng)盡量在完成樣本純化處理當(dāng)天進(jìn)行后續(xù)的DNA檢測(cè),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,并嚴(yán)格按照操作步驟完成操作。 細(xì)胞核酸提取試劑盒。
裂解效果不好?多加點(diǎn)裂解液。洗滌效果不好?多加點(diǎn)洗滌液。這是大家在使用核酸提取試劑盒時(shí)的慣性思維。但是對(duì)于磁珠法而言,每增加一部分液體體積,就減少了更多的磁珠碰撞幾率,而降低磁珠碰撞幾率,會(huì)導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候,雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起到增強(qiáng)裂解和增強(qiáng)洗滌的作用,但磁珠法提取的中心是磁珠吸附核酸的效率,無(wú)法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的,所以單純?cè)黾釉噭┦褂昧扛纳铺崛⌒Ч⒉灰欢ㄍ耆?span style="color:#f5c81c;">有效。支原體核酸提取失敗的原因有哪些?合肥宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程
支原體核酸提取過程中有哪些注意事項(xiàng)?合肥宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程
磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,具有其它傳統(tǒng)核酸提取方法不可比擬的優(yōu)勢(shì):(1)樣本需求量低:微量的生物樣本即可提到高濃度的核酸;(2)保護(hù)操作人員:全自動(dòng)核酸提取蕞大限度的減少操作人員與檢測(cè)的接觸,有效保護(hù)實(shí)驗(yàn)操作人員;(3)安全無(wú)毒無(wú)害:試劑不含酚、氯仿等有毒化學(xué)試劑,完全符合現(xiàn)代化環(huán)保理念。(4)磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度高,可直接用于PCR,回收率高(80%-120%)。合肥宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程