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本課題在體外分離、培養(yǎng)和鑒定人牙髓干細胞、牙周膜干細胞及根尖牙rutou干細胞的基礎上,通過比較體內、外不同培養(yǎng)模式下,血小板裂解液對這三種牙源性干細胞增殖及分化的影響,以期找到PL應用于牙源性干細胞培養(yǎng)、誘導分化的較好方式,為研究相關機制及組織工程應用提供實驗基礎,同時為將來PL在臨床zhiliao方面的應用提供新的思路。結果如下。1.牙髓干細胞、根尖牙rutou干細胞和牙周膜干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs,利用有限稀釋法克隆化培養(yǎng)以純化傳代細胞;采用免疫細胞染色及流式細胞儀鑒定細胞STRO-1等表型,確定所獲細胞的間充質干細胞屬性。采用成脂誘導及成骨/成牙本質誘導驗證細胞的多向分化能力。2.血小板裂解液的制備及相關培養(yǎng)體系的建立使用10人份機**小板,混合后利用凍融裂解法制得滿足實驗需要的血小板裂解液PL;將PL制成品以一定的體積濃度比加入普通培養(yǎng)基及礦化誘導培養(yǎng)基配制成條件培養(yǎng)液;將擴增培養(yǎng)所獲的牙源性干細胞以平面培養(yǎng)或復合HA-TCP支架培養(yǎng),營造不同的細胞培養(yǎng)空間環(huán)境。更多Sexton血小板裂解液相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio
本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液(NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產的,具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質干細胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進行傳代培養(yǎng)11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并與10%胎牛血清進行比較。羊膜來源間充質干細胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng),與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質干細胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進行比較。在所有實驗中,每天都監(jiān)測細胞,每次傳代結束時,收獲細胞,并使用臺盼藍和一個自動細胞計數(shù)器計數(shù)然后繼續(xù)傳代。更多關于血小板裂解液的相關信息,歡迎咨詢上海曼博生物,也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio可以購買到血清替代的公司。
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